Biotin-XX Tyramide Reagent
(Synonyms: biotin-LC-LC-tyramide) 目录号 : GC12033
Biotin-XX Tyramide Reagent是一种酶介导的酪胺信号放大（TSA）的生物素衍生物。
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Biotin-XX Tyramide Reagent is a biotin derivative for enzyme-mediated tyramide signal amplification (TSA) . Biotin-XX Tyramide Reagent utilizes horseradish peroxidase (HRP) to catalyze the covalent deposition of a biotin label adjacent to an immobilized enzyme. The deposited label can be detected with a streptavidin conjugate for imaging under bright field or fluorescence microscopy. The labeling reaction is fast (less than 10 minutes) [1]. Biotin-XX Tyramide Reagent can be used to increase the sensitivity of immunohistochemistry [2].
References:
[1] Hopman AH, Ramaekers FC, Speel EJ. Rapid synthesis of biotin-, digoxigenin-, trinitrophenyl-, and fluorochrome-labeled tyramides and their application for In situ hybridization using CARD amplification. J Histochem Cytochem. 1998 Jun;46(6):771-7.
[2] Freedman LJ, Maddox MT. A comparison of anti-biotin and biotinylated anti-avidin double-bridge and biotinylated tyramide immunohistochemical amplification. J Neurosci Methods. 2001 Nov 15;112(1):43-9.
Biotin-XX Tyramide Reagent是一种酶介导的酪胺信号放大（TSA）的生物素衍生物。利用辣根过氧化物酶（HRP）催化生物素标记物与固定化酶相邻的共价沉积，可用链霉亲和素缀合物检测沉积标记，用于在明场或荧光显微镜下成像，标记反应速度快（少于10分钟）[1]。常用于提高免疫组织化学灵敏度[2]。
本方案仅提供指导，应根据您的实际需求进行修改
1.酪胺信号扩增（TSA）操作准备：参考该篇文献方法 [1]，TSA按如下方法进行准备，Biotin-XX Tyramide（目录：GC12033）、抗荧光淬灭封片液(含DAPI)（目录号：GC26283）、HRP-conjugated Streptavidin （目录号：GC26343）、Streptavidin-FITC（目录号：GC19886）、TNT缓冲液（pH 7.5）(包含0.1 M Tris-HCl 、0.15 M NaCl和0.05% Tween 20) 、TNB缓冲液（TNT缓冲液+0.5％BSA）。
2. HRP Streptavidin binding结合：
①用TNB缓冲液封闭带有生物素标记的HeLa细胞30分钟。
②在TNB缓冲液中以1:1000稀释HRP Streptavidin binding，加入 HeLa细胞中并孵育30分钟。
③用TNT缓冲液洗涤细胞三次。(TNB缓冲液中BSA作为封闭剂)。
3.TSA 扩增：
①将 HeLa 细胞在扩增工作液中封闭10分钟（扩增工作液含1 μg/mL 生物素-XX-酪酰胺试剂（BXXP） 和 1 mM H2O2 溶解于 0.1 M 硼酸盐缓冲液 （pH 8.5）），
②用 TNT 缓冲液洗涤三次。
4. Streptavidin-FITC 结合：
①用 TNB 缓冲液封闭带有生物素标记的 HeLa 细胞 20 分钟。
②在 TNB 缓冲液中加入 1.0 μg/mL Streptavidin-FITC 后加入 HeLa 细胞并孵育 30 分钟。
③用 TNT 缓冲液清洗细胞三次。
5.荧光显微镜检测：
①将抗荧光淬灭封片液(含DAPI) （10 μL） 滴加到显微镜载玻片上。
②用尖头镊子将装有 HeLa 细胞的玻璃盖玻片从 24 孔板中取出，滴加含有DAPI的抗褪色封固剂（细胞面朝下）。
③用荧光显微镜在495nm/525nm (绿色) 的激发光和发射光条件下进行观察。
| Cas No. | SDF | ||
| 别名 | biotin-LC-LC-tyramide | ||
| 化学名 | N-(4-hydroxyphenethyl)-6-(6-(5-((3aS,4S,6aR)-2-oxohexahydro-1H-thieno[3,4-d]imidazol-4-yl)pentanamido)hexanamido)hexanamide | ||
| Canonical SMILES | O=C1N[C@@]([H])([C@]([H])(CS2)N1)[C@@H]2CCCCC(NCCCCCC(NCCCCCC(NCCC3=CC=C(O)C=C3)=O)=O)=O | ||
| 分子式 | C30H47N5O5S | 分子量 | 589.79 |
| 溶解度 | ≥ 59mg/mL in DMSO, ≥ 14.1 mg/mL in EtOH with ultrasonic | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.6955 mL | 8.4776 mL | 16.9552 mL |
| 5 mM | 0.3391 mL | 1.6955 mL | 3.391 mL |
| 10 mM | 0.1696 mL | 0.8478 mL | 1.6955 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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