Nitrotetrazolium Blue chloride
(Synonyms: 氯化硝基四氮唑兰,NBT; Nitro blue tetrazolium chloride) 目录号 : GC15554
Nitrotetrazolium Blue chloride（NBT）是一种脱氢酶底物，与碱性磷酸酶（ALP）底物5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯（BCIP）一起用于蛋白质印迹和免疫组化染色，产生紫蓝色沉淀。
Cas No.:298-83-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Nitrotetrazolium Blue chloride (NBT) is a dehydrogenase substrate that is used in western blots and immunohistochemical staining with the alkaline phosphatase (ALP) substrate 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate (BCIP) to produce a purple-blue precipitate[1]. Nitrotetrazolium Blue chloride can visualize the localization of target mRNAs at cellular resolution in embryos or tissues [2]. Nitrotetrazolium Blue chloride can react with reactive oxygen species (ROS) and superoxide anions (O2-) in cells or tissues to produce dark blue insoluble formazan compounds [3, 4]. Nitrotetrazolium Blue chloride can stain intracellular ALP and succinate dehydrogenase (SDH) [5, 6].
References:
[1]Santangelo K S, Schaefer D M W, Leavell S E, et al. Special Staining Techniques: Application and Quality Assurance[J]. Veterinary Cytology, 2020: 47-72.
[2]Narayanan R, Oates A C. Detection of mRNA by whole mount in situ hybridization and DNA extraction for genotyping of zebrafish embryos[J]. Bio-protocol, 2019, 9(6): e3193-e3193.
[3]Lamacchia M, Dyrka W, Breton A, et al. Overlapping Podospora anserina transcriptional responses to bacterial and fungal non self indicate a multilayered innate immune response[J]. Frontiers in microbiology, 2016, 7: 471.
[4]Kumar D, Yusuf M A, Singh P, et al. Histochemical detection of superoxide and H2O2 accumulation in Brassica juncea seedlings[J]. Bio-protocol, 2014, 4(8): e1108-e1108.
[5]Yang C S, Gu Z T, Ding R, et al. Retracted: Long non‐coding RNA MEG3 silencing and microRNA‐214 restoration elevate osteoprotegerin expression to ameliorate osteoporosis by limiting TXNIP[J]. Journal of cellular and molecular medicine, 2021, 25(4): 2025-2039.
[6]Wang G, Biswas A K, Ma W, et al. Metastatic cancers promote cachexia through ZIP14 upregulation in skeletal muscle[J]. Nature medicine, 2018, 24(6): 770-781.
Nitrotetrazolium Blue chloride（NBT）是一种脱氢酶底物，与碱性磷酸酶（ALP）底物5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯（BCIP）一起用于蛋白质印迹和免疫组化染色，产生紫蓝色沉淀[1]。Nitrotetrazolium Blue chloride可以在胚胎或组织中以细胞分辨率可视化靶mRNA的定位[2]。Nitrotetrazolium Blue chloride可以在细胞或组织中与活性氧（ROS）和超氧阴离子（O2-）反应生成深蓝色不溶性甲臜化合物[3, 4]。Nitrotetrazolium Blue chloride可以对细胞内ALP和琥珀酸脱氢酶（SDH）染色[5, 6]。
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. NBT和BCIP（GC39345）免疫印迹实验方案[1](来自文献,仅做参考)
（1）溶液配置：
NBT原液：将0.5g NBT溶解在10 mL 70% DMF水溶液中。
BCIP原液：将0.5g BCIP溶解在10 mL 70% DMF水溶液中。
底物缓冲液：100 mM 二乙醇胺缓冲液（pH 9.5），含有100mM NaCl和5 mM MgCl2。
（2）制备NBT/BCIP溶液，将66 µL NBT原液添加到10 mL底物缓冲液中并充分混合。在溶液中加入33 μL的BCIP原液。1小时内使用NBT/BCIP溶液。
（3）将印迹膜放入合适的容器中并添加NBT/BCIP溶液。15 × 15cm2 的膜采用10mL溶液。在室温下搅拌并孵育，直至条带适当变暗，通常需要大约30 min。
（4）除去NBT/BCIP溶液，并用水冲洗印迹膜以终止反应。
2. NBT用于幼苗超氧化物积累的组织化学检测[2](来自文献,仅做参考)
（1）在琥珀色瓶中，将0.1g NBT溶于50mM磷酸钠缓冲液（pH 7.5）中，使体积至50ml，得到0.2% NBT染色液。
（2）将幼苗放入试管中，浸入NBT染色液中，用铝箔包裹管子，并在室温下过夜。
（3）倒掉染色液，将幼苗浸入无水乙醇中并在沸水浴中加热 10min（或必要时更长时间，间歇性摇晃）去除叶绿素。
（4）将幼苗转移到浸有60%甘油的纸巾上，在对比背景上拍摄染色的幼苗。
注意：确保所有溶液都是新鲜配制的，并且所有设备都是干净的，以避免污染。避免直接接触反应试剂。
References:
[1]Kurien B T, Bachmann M P. On-membrane renaturation of recombinant Ro60 autoantigen by calcium ions[J]. Detection of Blotted Proteins: Methods and Protocols, 2015: 255-261.
[2]Kumar D, Yusuf M A, Singh P, et al. Histochemical detection of superoxide and H2O2 accumulation in Brassica juncea seedlings[J]. Bio-protocol, 2014, 4(8): e1108-e1108.
| Cas No. | 298-83-9 | SDF | |
| 别名 | 氯化硝基四氮唑兰,NBT; Nitro blue tetrazolium chloride | ||
| 化学名 | 3,3'-(3,3'-dimethoxy-[1,1'-biphenyl]-4,4'-diyl)bis(2-(4-nitrophenyl)-5-phenyl-2H-tetrazol-3-ium) | ||
| Canonical SMILES | COC1=C([N+]2=NC(C3=CC=CC=C3)=NN2C4=CC=C([N+]([O-])=O)C=C4)C=CC(C5=CC(OC)=C([N+]6=NC(C7=CC=CC=C7)=NN6C8=CC=C([N+]([O-])=O)C=C8)C=C5)=C1 | ||
| 分子式 | C40H30N10O6 • 2Cl | 分子量 | 817.63 |
| 溶解度 | ≥ 10mg/mL in Water with gentle warming, 70%DMF : ≥ 100 mg/mL (122.30 mM), DMSO : 33.33 mg/mL (40.76 mM) | 储存条件 | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.223 mL | 6.1152 mL | 12.2305 mL |
| 5 mM | 0.2446 mL | 1.223 mL | 2.4461 mL |
| 10 mM | 0.1223 mL | 0.6115 mL | 1.223 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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