Sel-green

Sel-green探针用于活细胞硒醇荧光成像^[1]

本实验方案根据研究内容整理，仅供参考，请根据实际需求进行调整。

1.试剂准备：将Sel-green溶解于二甲基亚砜（DMSO）中，配制成适当浓度的储备液（如5-10mM），使用时用细胞培养基稀释至工作浓度20µM；使用细胞培养基（含10%胎牛血清FBS；2mM谷氨酰胺；100U/mL青霉素/链霉素）配制含硒化合物（如Na₂SeO₃、(Sec)₂等）的处理液，工作浓度通常为5µM。

2. 细胞培养与铺板：将细胞在37°C、5% CO₂条件下，用上述完全培养基进行常规培养。在成像实验前一天，将细胞以适当密度接种于12或24孔板中，每孔加入适量培养基（如12孔板加1mL，24孔板加0.5mL），培养24小时使细胞贴壁。

3.细胞处理与探针孵育：

（1）内源性硒醇诱导：若要检测内源性硒代半胱氨酸（Sec），可在成像前用Na₂SeO₃（5µM）处理细胞1小时或12小时，以增加细胞内Sec水平。

（2）外源性硒醇检测：若要检测外源性Sec，可用(Sec)₂（5µM）处理细胞1小时。

（3）不同硒化合物代谢研究：用目标硒化合物（如SeO₂、Na₂SeO₃、DBDS等；5µM）处理细胞1、6或12小时。

4. 荧光成像：向清洗后的细胞中加入用培养基新鲜配制的Sel-green工作液（20µM），在37°C下避光孵育30分钟。孵育结束后，用PBS清洗细胞三次，以去除未进入细胞的探针。立即使用荧光成像系统进行观察和图像采集。Sel-green的激发/发射波长约为370/502nm，产生绿色荧光。

注意事项：

（1）Sel-green是首个可在生理条件（pH=7.4）下工作的选择性硒醇荧光探针，对硒代半胱氨酸（Sec）的响应信号比普通生物硫醇（如Cys, GSH）高100倍以上。

（2）Sel-green的潜在缺点是其在细胞成像中的灵敏度相对较低，这可能限制其在体内低浓度内源性硒醇检测中的应用

（3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

References:

[1] Zhang B, Ge C, Yao J, et al. Selective selenol fluorescent probes: design, synthesis, structural determinants, and biological applications. J Am Chem Soc. 2015 Jan 21;137(2):757-69.