H-Gln-βNA . HCl是一种用于谷氨酰胺酰环化酶的特异性荧光底物，激发波长为320nm，发射波长为410nm。
Cas No.:201988-95-6
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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H-Gln-βNA . HCl is a specific fluorescent substrate for glutaminyl cyclase, with the excitation wavelength of 320nm and emission wavelength of 410nm[1]. H-Gln-βNA . HCl can be used to detect the activity-dependent secretion of glutaminyl cyclase in the secretory products of chromaffin cells[2]. H-Gln-βNA . HCl can be used to evaluate the glutaminyl cyclase inhibitors related to metal chelating agents and imidazole derivatives[3].
References:
[1] Koch B, Kolenko P, Buchholz M, et al. Crystal structures of glutaminyl cyclases (QCs) from Drosophila melanogaster reveal active site conservation between insect and mammalian QCs[J]. Biochemistry, 2012, 51(37): 7383-7392.
[2] Cynis H, Funkelstein L, Toneff T, et al. Pyroglutamate-amyloid-β and glutaminyl cyclase are colocalized with amyloid-β in secretory vesicles and undergo activity-dependent, regulated secretion[J]. Neurodegenerative Diseases, 2014, 14(2): 85-97.
[3] Huang K F, Hsu H L, Karim S, et al. Structural and functional analyses of a glutaminyl cyclase from Ixodes scapularis reveal metal-independent catalysis and inhibitor binding[J]. Biological Crystallography, 2014, 70(3): 789-801.
H-Gln-βNA . HCl是一种用于谷氨酰胺酰环化酶的特异性荧光底物，激发波长为320nm，发射波长为410nm[1]。H-Gln-βNA . HCl可用于检测嗜铬细胞分泌产物中谷氨酰胺酰环化酶的活性依赖性分泌[2]。H-Gln-βNA . HCl可用于评估与金属螯合剂和咪唑衍生物相关的谷氨酰胺酰环化酶抑制剂[3]。
使用H-Gln-βNA . HCl作为底物测定谷氨酰环化酶活性[1]
本方案仅提供一个参考，具体操作应根据您的实际需求进行调整。
1. 制备溶液
（1）制备储备溶液：用高纯度无水二甲基亚砜（DMSO）配制浓度为1mM的H-Gln-βNA . HCl储备溶液。注意：将未使用的储备溶液分装并存放在避光条件下于-20°C下保存，以避免反复冻融。
（2）制备工作溶液：用PBS对储备溶液进行稀释，制备浓度为100μM的工作溶液。请根据实际情况调整工作液的浓度，并立即准备，以免反复冻融。注意：实验当天必须新鲜配制工作液。
2. 样品预处理
从大脑或外周组织提取的样本用由10mM Tris、100mM NaCl、5mM EDTA、0.5%Triton X-100和10%甘油组成的缓冲液（pH 7.5）进行匀浆。匀浆液进一步进行超声处理并以16000×g的速度在4°C下离心30分钟。含有glutaminyl cyclase和iso-glutaminyl cyclase的上清液中的蛋白质浓度被调整至5-7mg/ml。
3. 反应与检测
反应样本由50μM的H-Gln-βNA . HCl在25mM的MOPS溶液（pH 7.0）中与0.1mM的N-乙基马来酰亚胺混合而成，并加入酶溶液，最终体积为1ml。反应温度为37°C。测试样本需保存至多1小时，然后通过沸煮5分钟并进行10分钟的离心（16000×g）来终止反应。上清液用于高效液相色谱分析。将20μl样品注入系统，并通过将溶剂A（含0.1%TFA的乙腈）的浓度从8%增加到20%来改变溶剂B（含0.1%TFA的H2O）的浓度来进行分离。谷氨酰环化酶活性通过测定pGlu-βNA的标准曲线来定量。
4. 注意事项：
（1）请尽可能避免光照以减缓荧光猝灭。
（2）为了您的安全和健康，请在操作时穿戴实验室外套和一次性手套。
（3）H-Gln-βNA . HCl在整个实验过程中应存放在黑暗中。
（4）本实验方案及所有试剂仅用于科学研究用途。
References:
[1] Schilling S, Kohlmann S, Bäuscher C, et al. Glutaminyl cyclase knock-out mice exhibit slight hypothyroidism but no hypogonadism: implications for enzyme function and drug development[J]. Journal of Biological Chemistry, 2011, 286(16): 14199-14208.
| Cas No. | 201988-95-6 | SDF | |
| 分子式 | C15H17N3O2 · HCl | 分子量 | 307.8 |
| 溶解度 | Soluble in DMSO | 储存条件 | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2489 mL | 16.2443 mL | 32.4886 mL |
| 5 mM | 649.8 μL | 3.2489 mL | 6.4977 mL |
| 10 mM | 324.9 μL | 1.6244 mL | 3.2489 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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