DiIC1(5)是一种用于检测线粒体膜电位破坏的信号关闭型荧光探针，激发/发射波长分别为638nm和 675nm。
Cas No.:36536-22-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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DiIC1(5) is a signal-off fluorescent probe for the detection of mitochondrial membrane potential disruption, with excitation/emission of 638/675nm, respectively [1]. DiIC1(5) penetrates the plasma membrane of eukaryotic cells and accumulates primarily in mitochondria with active membrane potentials, and a breakdown of the mitochondrial membrane potential reflects cell death and is detected by a drop in the DiIC1(5) signal [2]. DiIC1(5) has been widely used in multichannel flow cytometry to study the activation of apoptosis in sperm[3]. DiIC1(5) can be used to develop the novel flow cytometry assay to measure mitochondrial reactive oxygen intermediates (ROI) production and to study the functional integrity of respiratory chain complexes at the single-cell level[4].
References:
[1] Munoz L E, Maueröder C, Chaurio R, et al. Colourful death: Six-parameter classification of cell death by flow cytometry—Dead cells tell tales[J]. Autoimmunity, 2013, 46(5): 336-341.
[2] Janko C, Munoz L, Chaurio R, et al. Navigation to the graveyard-induction of various pathways of necrosis and their classification by flow cytometry[M]//Necrosis: Methods and Protocols. Totowa, NJ: Humana Press, 2013: 3-15.
[3] Kim H H, Funaro M, Mazel S, et al. Flow cytometric characterization of apoptosis and chromatin damage in spermatozoa[J]. Reproductive BioMedicine Online, 2013, 26(4): 393-395.
[4] Pham N A, Robinson B H, Hedley D W. Simultaneous detection of mitochondrial respiratory chain activity and reactive oxygen in digitonin‐permeabilized cells using flow cytometry[J]. Cytometry: The Journal of the International Society for Analytical Cytology, 2000, 41(4): 245-251.
DiIC1(5)是一种用于检测线粒体膜电位破坏的信号关闭型荧光探针，激发/发射波长分别为638nm和 675nm[1]。DiIC1(5)能够穿透真核细胞的质膜，并主要积聚在具有活跃膜电位的线粒体中；线粒体膜电位的崩溃反映了细胞死亡，可通过DiIC1(5)信号的下降来检测[2]。DiIC1(5)已被广泛用于多通道流式细胞术中，以研究精子凋亡的激活过程[3]。DiIC1(5)可用于开发新型流式细胞检测方法，以测量线粒体活性氧中间体的产生，并在单细胞水平上研究呼吸链复合物的功能完整性[4]。
使用DiIC1(5)测定线粒体膜电位状态
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1.细胞膜染色液制备
（1）配置DiIC1(5)储备液：DiIC1(5)储备液用DMSO配置，浓度1-5mM。
注意：未使用的储备液分装保存在-20℃避光保存，避免反复冻融。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如:无血清培养基或PBS）稀释储备液，配制浓度为0.1-5μM的工作液。
注意:工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。
2.悬浮细胞染色
（1）悬浮细胞经4°C、1000g离心3-5分钟，弃去上清液。用PBS清洗两次，每次5分钟。
（2）加入1mL的染料工作溶液，室温避光孵育5-30分钟。
注意：不同的细胞最佳培养时间不同，可以根据具体实验需求进行调整。
（3）孵育结束后，经1000-1500g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
（4）用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞。通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
3.贴壁细胞染色
（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）从盖玻片的一角加入100μl的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）室温避光孵育5-30分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
（5）孵育结束后吸弃染料工作液，用预温的培养液洗盖玻片2-3次。
4.显微镜检测：DiIC1(5)工作液的激发/发射光分别为638/675nm。
注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Bucher K, Malama E, Siuda M, et al. Multicolor flow cytometric analysis of cryopreserved bovine sperm: a tool for the evaluation of bull fertility[J]. Journal of dairy science, 2019, 102(12): 11652-11669.
| Cas No. | 36536-22-8 | SDF | |
| 别名 | 1,1',3,3,3',3'-六甲基吲哚双碳菁碘 | ||
| Canonical SMILES | CC1(C)C2=CC=CC=C2N(C)/C1=C/C=C/C=C/C3=[N+](C)C4=C(C=CC=C4)C3(C)C.[I-] | ||
| 分子式 | C27H31N2•I | 分子量 | 510.5 |
| 溶解度 | DMF: 20 mg/ml,DMSO: 20 mg/ml,Ethanol: 2 mg/ml,PBS (pH 7.2): 0.3 mg/ml | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.9589 mL | 9.7943 mL | 19.5886 mL |
| 5 mM | 391.8 μL | 1.9589 mL | 3.9177 mL |
| 10 mM | 195.9 μL | 979.4 μL | 1.9589 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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