Dibenzylfluorescein是一种荧光探针，激发波长为485nm，发射波长为535nm。
Cas No.:97744-44-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Dibenzylfluorescein is a fluorogenic probe with the excitation wavelength of 485nm and emission wavelength of 535nm [1]. Dibenzylfluorescein acts as a substrate for specific cytochrome P450 (CYP) isoforms, including CYP3A4, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, and aromatase (CYP19), and is typically used near the apparent Km value of 0.87-1.9µM[1, 2]. Dibenzylfluorescein is suitable for use in the progress curve analysis approach and can be used as an initial screen to identify compounds that require more detailed investigations in drug interaction optimization[3]. Dibenzylfluorescein can be used to develop cell-based assays to simultaneously assess enzyme activity, protein half-life, cell viability, and screen inhibitors with slow dissociation rates[4].
References:
[1] Work H M, Kandel S E, Lampe J N. Characterization of fluorescent probe substrates to develop an efficient high-throughput assay for neonatal hepatic CYP3A7 inhibition screening[J]. Scientific Reports, 2021, 11(1): 19443.
[2] Stresser D M, Blanchard A P, Turner S D, et al. Substrate-dependent modulation of CYP3A4 catalytic activity: analysis of 27 test compounds with four fluorometric substrates[J]. Drug Metabolism and Disposition, 2000, 28(12): 1440-1448.
[3] Salminen K A, Leppänen J, Venäläinen J I, et al. Simple, direct, and informative method for the assessment of CYP2C19 enzyme inactivation kinetics[J]. Drug metabolism and disposition, 2011, 39(3): 412-418.
[4] Heidary D K, Kriger S M, Hachey A C, et al. A fluorometric CYP19A1 (aromatase) activity assay in live cells[J]. ChemMedChem, 2021, 16(18): 2845-2850.
Dibenzylfluorescein是一种荧光探针，激发波长为485nm，发射波长为535nm[1]。Dibenzylfluorescein作为特定细胞色素P450（CYP）亚型的底物，包括CYP3A4、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19和芳香化酶（CYP19），通常在接近表观Km值0.87-1.9µM的范围内使用[1, 2]。Dibenzylfluorescein适用于进度曲线分析方法，可作为初步筛选工具，以识别需要在药物相互作用优化中进行更详细研究的化合物[3]。Dibenzylfluorescein可用于开发基于细胞的检测方法，以同时评估酶活性、蛋白半衰期、细胞活力，并筛选具有慢解离速率的抑制剂[4]。
基于Dibenzylfluorescein的检测方法筛选CYP19A1抑制剂
本方案仅提供指南，应根据您的具体需要进行修改
1. 制备染色液
（1）配制储备液：在优质无水DMSO中配制浓度为1mM的Dibenzylfluorescein储备液。注意：将未使用的原液分装，-20°C避光保存，避免反复冻融。
（2）配制工作液：将原液用PBS稀释，配制浓度为10μM的工作液。请根据实际情况调整工作液的浓度，立即准备，避免反复冻融。注意：工作液必须在实验当天新鲜配制。
2. 细胞的制备
HEK293 T-REx细胞以4×104/孔的密度接种于96孔板中，在DMEM培养基中生长过夜。每孔实验前2小时用90µl DMEM+2% 胎牛血清（FBS）替换培养基以减少背景。
3. 抑制剂或待测化合物预处理（可选）
（1）添加10µl抑制剂（或待测化合物）溶液（10×）或对照；37℃，5% CO2孵育90min。
（2）用100µl温DMEM培养基洗涤3次，去除未结合的抑制剂或者待测化合物。
4. 底物添加与分析
（1）用含2% FBS和1μg/ml四环素的培养基对抑制剂（或待测化合物）进行连续稀释，将等体积的抑制剂（或待测化合物）加入到细胞中。
（2）孵育1h后，向细胞中加入浓度为1μM的Dibenzylfluorescein工作液。
（3）在激发波长480nm和发射波长530nm的条件下在24小时期间实施检测。
5. 预防措施:
（1）荧光染料均存在淬灭问题。请尽量避光，以减缓荧光猝灭。
（2）为了您的安全和健康，请您在操作时穿工作服，戴一次性手套
（3）Dibenzylfluorescein在整个实验过程中应避光保存。
（4）本方案及所有试剂仅供科学研究使用。
References:
[1] Heidary D K, Kriger S M, Hachey A C, et al. A fluorometric CYP19A1 (aromatase) activity assay in live cells[J]. ChemMedChem, 2021, 16(18): 2845-2850.
| Cas No. | 97744-44-0 | SDF | |
| 别名 | DBF, NSC 645658 | ||
| Canonical SMILES | O=C1C=C2OC3=CC(OCC4=CC=CC=C4)=CC=C3C(C5=CC=CC=C5C(OCC6=CC=CC=C6)=O)=C2C=C1 | ||
| 分子式 | C34H24O5 | 分子量 | 512.6 |
| 溶解度 | DMF: 25 mg/ml,DMF:PBS(pH7.2) (1:2): 0.25 mg/ml,DMSO: 10 mg/ml | 储存条件 | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.9508 mL | 9.7542 mL | 19.5084 mL |
| 5 mM | 390.2 μL | 1.9508 mL | 3.9017 mL |
| 10 mM | 195.1 μL | 975.4 μL | 1.9508 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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