2-Nitro-5-thiocyanatobenzoic Acid是一种高反应性的氰基供体。
Cas No.:30211-77-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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2-Nitro-5-thiocyanatobenzoic Acid is a highly reactive cyano group donor. 2-Nitro-5-thiocyanatobenzoic Acid can rapidly transfer its cyano group to a nucleophilic thioester, converting the cysteine thiol groups in proteins into S-cyano derivatives, while simultaneously achieving functionalization modification at the C-terminus of proteins through the formation of a 1-acyl-2-iminothiazolidine intermediate. 2-Nitro-5-thiocyanatobenzoic Acid can be used in research related to protein chemical synthesis, cysteine-specific cleavage and labeling, and polypeptide drug development[1-4].
References:
[1] Tang HY, Speicher DW. Identification of alternative products and optimization of 2-nitro-5-thiocyanatobenzoic acid cyanylation and cleavage at cysteine residues. Anal Biochem. 2004 Nov 1;334(1):48-61.
[2] Belghazi M, Klett D, Cahoreau C, et al. Nitro-thiocyanobenzoic acid (NTCB) reactivity of cysteines beta100 and beta110 in porcine luteinizing hormone: metastability and hypothetical isomerization of the two disulfide bridges of its beta-subunit seatbelt. Mol Cell Endocrinol. 2006 Mar 9;247(1-2):175-82.
[3] Koehn H, Clerens S, Deb-Choudhury S, et al. Higher sequence coverage and improved confidence in the identification of cysteine-rich proteins from the wool cuticle using combined chemical and enzymatic digestion. J Proteomics. 2009 Dec 1;73(2):323-30.
[4] Chu Y, Lee EY, Reimann EM, et al. Effect of activation of protein phosphatase 1 on sulfhydryl reactivity. Arch Biochem Biophys. 1996 Oct 1;334(1):83-8.
2-Nitro-5-thiocyanatobenzoic Acid是一种高反应性的氰基供体。2-Nitro-5-thiocyanatobenzoic Acid可迅速将其氰基转移到亲核硫酯上，将蛋白质中的半胱氨酸巯基转化为S-氰基衍生物，同时通过形成1-酰基-2-亚氨基噻唑烷中间体以实现蛋白质碳端的功能化修饰。2-Nitro-5-thiocyanatobenzoic Acid可用于蛋白质化学合成、半胱氨酸特异性切割和标记以及多肽药物开发的相关研究[1-4]。
2-Nitro-5-thiocyanatobenzoic Acid诱导DNase失活[1]
本实验方案根据研究内容整理，仅供参考，请根据实际需求进行调整。
1.试剂准备：将2-Nitro-5-thiocyanatobenzoic Acid溶解于适当缓冲液中作为工作液（33mM），包括Iodoacetate（67mM）、N-ethylmorpholine acetate（0.2mM）；准备DNase I（10mg）。
2.DNase的2-Nitro-5-thiocyanatobenzoic Acid处理与失活：在含有Ca²⁺的条件下，将DNase I与2-Nitro-5-thiocyanatobenzoic Acid工作液在室温下孵育。通过定时测定剩余的DNase酶活来监测失活动力学，完全失活通常需要数小时。
3.肽键断裂分析与修饰位点鉴定：经2-Nitro-5-thiocyanatobenzoic Acid处理后，酶分子会在特定丝氨酸（Ser）和苏氨酸（Thr）残基的N端发生肽键断裂。通过凝胶色谱和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离产生的多肽片段。通过从凝胶中洗脱蛋白质条带并进行氨基酸组成分析。
注意事项：
（1）Ca²⁺是2-Nitro-5-thiocyanatobenzoic Acid诱导DNase失活所必需的辅助因子。
（2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Liao TH, Wadano A. Inactivation of DNase by 2-nitro-5-thiocyanobenzoic acid. II. Serine and threonine are the sites of reaction on the DNase molecule. J Biol Chem. 1979 Oct 10;254(19):9602-7.
| Cas No. | 30211-77-9 | SDF | |
| 别名 | 2-硝基-5-氰硫基苯甲酸,NTCB | ||
| Canonical SMILES | OC(C1=C([N+]([O-])=O)C=CC(SC#N)=C1)=O | ||
| 分子式 | C8H4N2O4S | 分子量 | 224.2 |
| 溶解度 | DMF: 25 mg/ml,DMSO: 11 mg/ml,Ethanol: 25 mg/ml,PBS (pH 7.2): 0.3 mg/ml | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 4.4603 mL | 22.3015 mL | 44.603 mL |
| 5 mM | 892.1 μL | 4.4603 mL | 8.9206 mL |
| 10 mM | 446 μL | 2.2302 mL | 4.4603 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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