1,3-Diphenylisobenzofuran

本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1.制备染色液
(1)配置染料储存液：使用高质量无水DMSO配制浓度为10-20mM的储存液；
注意：未使用的储存液建议分装后在-20℃或-80°C避光保存，避免反复冻融。
(2)配置染料工作液：使用合适的缓冲液（如无血清细胞培养基或PBS，需预热）稀释储存液，配制浓度为10-20μM的染料工作液。
注意：请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配。
2.细胞染色
(1)悬浮细胞：经1000g离心3-5分钟，弃去上清液，使用PBS或其他缓冲液清洗两次，每次5分钟；
(2)贴壁细胞：使用PBS或其他缓冲液清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min；
(3)加入染料工作溶液重悬细胞，将细胞在室温下避光孵育15-45min以允许染料渗透；
注意：
①建议染色过程中每隔5-10min重悬细胞一次，以便充分染色；
② 不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(4)孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除染色液，加入PBS或其他缓冲液清洗2-3次，去除残留探针。
3.细胞贴壁染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞；
(2)从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中；
(3)从盖玻片的一角加入约100-150μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞；
(4) 将细胞在室温下避光孵育15-45min以允许染料渗透；
注意：不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索；
(5)孵育结束后吸弃染料工作液，使用PBS或其他缓冲液清洗盖玻片2~3次。
4.荧光检测：通过荧光显微镜或流式细胞仪对染色结果进行观察。1,3-Diphenylisobenzofuran的最大激发光/发射光波长为495/523nm。

注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。