BCA Protein Assay Kit (BCA蛋白浓度测定试剂盒)

以微孔酶标仪检测法为例：

1、以50:1的比例混合BCA试剂A和BCA试剂B。即将50 ml BCA试剂A与1 ml BCA试剂B混合。

注意: 使用以下公式确定所需工作试剂的总量：

(标准品+待测样品) * (重复次数) * (每个样品所需要的BCA工作液) =所需BCA工作液总体积。

2、将25μl的每种标准品和蛋白质样品添加到单独的微孔板孔中。

注意：如果蛋白样品十分珍贵，可以使用PBS将蛋白样品稀释5-10倍，并在计算蛋白浓度时乘以稀释倍数。

3、向每个孔中添加200μl BCA工作试剂并混合。

4、密封板并在37℃下孵育30分钟。

5、将板冷却至室温(RT)。

6、在10分钟内在读板器上测量562 nm的吸光度。

7、从所有读数中减去空白的OD562，绘制BSA标准曲线: OD562 (在Y轴上) 对BSA标准浓度 (在X轴上)。

8、使用标准曲线确定每个待测样品的蛋白质浓度。

重要产品信息

1.如果将本试剂盒冷藏或存放在冷库中, 则试剂A或试剂B中可能会形成沉淀物。要溶解沉淀物, 请在37°C下缓慢加热溶液, 同时进行混合或微波处理几秒钟. 如果试剂盒被细菌污染, 则将其丢弃。

2.如果样品中仍然存在还原性物质或金属螯合物而引起干扰, 建议使用Bradford分析试剂盒(GK10027)。

3.建议一式两份地测定不同浓度和样品的标准液. 每种测定均应绘制标准曲线。

4.彻底混合试剂A和试剂B后, 新形成的绿色浊度将消失. 它不会影响性能。

5.使用分光光度计检测蛋白质浓度时, 测定的样品量将减少. 使用37°C的培养箱时, 请防止水蒸发的影响。

6.消除或最小化干扰物质影响的几种方法:

•通过透析或凝胶过滤去除干扰物质。

•稀释样品，直到物质不再干扰为止。

•由于高浓度的去污剂也会影响结果, 因此请用三氯乙酸 (TCA) 沉淀样品中的蛋白质。

7，避免使用包括还原性物质, 螯合剂, 强酸和强碱在内的物质, 因为即使浓度很低也会干扰蛋白质的估算。