Monochlorobimane (Chlorobimane)是一种非荧光细胞渗透性探针，激发波长为380nm，发射波长为470nm。
Cas No.:76421-73-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Monochlorobimane (Chlorobimane) is a non-fluorescent cell-permeant probe at 380nm wavelength excitation and 470nm wavelength emission[1]. Once inside the cell, Monochlorobimane reacts with reduced glutathione (GSH) to form fluorescent bimane–glutathione (B-SG) adducts, in a reaction catalyzed by glutathione S-transferase[2]. Monochlorobimane has been widely used for detecting GSH levels and screening bacterial populations that express glutathione transferase (GST)[3].
In vivo, intracranially inject 10μg/5μl of Monochlorobimane at a rate of 5μl/3min for 30 minutes, which significantly reduced the staining of cytochrome c oxidase (COX) and succinate dehydrogenase (SDH) in the hippocampus of rats induced by microsphere embolism (ME)[4].
References:
[1] Kamencic H, Lyon A, Paterson P G, et al. Monochlorobimane fluorometric method to measure tissue glutathione[J]. Analytical biochemistry, 2000, 286(1): 35-37.
[2] Machado M D, Soares E V. Assessment of cellular reduced glutathione content in Pseudokirchneriella subcapitata using monochlorobimane[J]. Journal of Applied Phycology, 2012, 24(6): 1509-1516.
[3] Eklund B I, Edalat M, Stenberg G, et al. Screening for recombinant glutathione transferases active with monochlorobimane[J]. Analytical biochemistry, 2002, 309(1): 102-108.
[4] Oshikawa S, Miyake-Takagi K, Takagi N, et al. Effects of monochlorobimane on cerebral ischemia-induced damage to mitochondria[J]. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 2004, 27(2): 166-169.
Monochlorobimane (Chlorobimane)是一种非荧光细胞渗透性探针，激发波长为380nm，发射波长为470nm[1]。Monochlorobimane进入细胞后，在谷胱甘肽S-转移酶(GST)的催化下与还原型谷胱甘肽反应，形成具有荧光的硼烷-谷胱甘肽(B-SG)加合物[2]。Monochlorobimane已广泛应用于检测细胞内谷胱甘肽水平及筛选表达GST的细菌群体[3]。
在体内，以5μl/3分钟的速率向大鼠颅内注射10μg/5μl的Monochlorobimane持续30分钟，可显著减轻微球栓塞诱导的海马区细胞色素c氧化酶和琥珀酸脱氢酶染色强度[4]。
使用Monochlorobimane测定谷胱甘肽含量
本方案仅提供了一种参考方法，具体操作需根据您的实际需求进行调整。
1. 用于细胞 DHE 染色的染料和稀释溶液的制备
将Monochlorobimane的储备液（在DMSO中的浓度为50mM）用 PBS 进行稀释，使其成为最终浓度为1mM的工作溶液。注意：工作溶液必须在实验当天新鲜配制。
2. 细胞采集
通过离心（转速 2500×g；持续15分钟）从藻类细胞的生长指数期采集细胞，并在EP管内将细胞悬浮在新鲜培养基中，浓度为1×106个细胞/ml。
3. 细胞染色
（1）从EP管中取出培养液，并用1×PBS溶液轻轻冲洗一次。
（2）向EP管中加入适量含有20μM的Monochlorobimane的培养液，混合均匀后在96孔微孔板上等分200μl，并在黑暗中于25°C下孵育30分钟。
（3）30分钟孵育结束后，移除含有Monochlorobimane的培养液，并用1×PBS溶液轻轻冲洗每个培养皿三次。
（4）将培养板移至微孔板读数仪（Ex/Em=380/480nm）上，测量荧光强度。
4. 实验注意事项
（1）在整个实验过程中，Monochlorobimane应存放在避光环境中。
（2）本实验方案及所有试剂仅供科学研究使用。
References:
[1] Machado M D, Soares E V. Assessment of cellular reduced glutathione content in Pseudokirchneriella subcapitata using monochlorobimane[J]. Journal of Applied Phycology, 2012, 24(6): 1509-1516.
| Cas No. | 76421-73-3 | SDF | |
| 别名 | Chlorobimane | ||
| Canonical SMILES | O=C1N(C(C(C)=C2C)=O)N2C(CCl)=C1C | ||
| 分子式 | C10H11ClN2O2 | 分子量 | 226.66 |
| 溶解度 | DMSO : 50 mg/mL (220.59 mM; Need ultrasonic) | 储存条件 | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 4.4119 mL | 22.0595 mL | 44.1189 mL |
| 5 mM | 882.4 μL | 4.4119 mL | 8.8238 mL |
| 10 mM | 441.2 μL | 2.2059 mL | 4.4119 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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- SDS (Safety Data Sheet)
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