Lipo2000 Transfection Reagent

1.细胞准备
贴壁细胞：建议在转染前一天进行铺板，使用不含抗生素的培养基接种细胞，使之在第二天能够达到70-90%的汇合度。
悬浮细胞：建议在转染当日细胞密度达到2-4×106 /ml。
2. Lipo2000 Transfection Reagent转染方案

3.质粒DNA和siRNA的共转染Lipo2000试剂适用于同时转染质粒DNA和siRNA，每1μg DNA添加30pmol (~0.6μg) siRNA。
4.mRNA转染Lipo2000试剂适用于转染mRNA，以24孔板为例，每孔添加0.5–1μg mRNA。
5. 不同细胞培养板转染的培养基、核酸及Lipo2000用量推荐表

注意事项：
1、每次实验时的细胞状态、DNA或siRNA均有一定程度的区别，建议通过预实验摸索最佳条件，尤其是转染试剂的用量，同时设置阳性对照和阴性对照。
2、转染时应注意脂质体和质粒的用量比例，脂质体过量会对细胞产生较大毒性，从而导致实验失败。为达到最高的转染效率和最低细胞毒性，可以对DNA和Lipo2000的比例以及细胞密度进行优化，一般在1:0.5~1:5的范围内优化DNA(μg)和Lipo2000(μl)的比例。
3、细胞状态对转染效果的影响较大，转染时细胞应处于良好生长状态，建议转染时细胞密度达到70-80%。
4、对于贴壁细胞，建议在铺板12-24h后进行转染，此时细胞贴壁情况良好。
5、为提高转染效率，建议在转染前铺板时使用不含抗生素的培养基接种细胞，并在转染前2h将培养基更换为低血清（2%）、无抗生素的培养基对细胞进行饥饿处理，转染后4-6h更换为完全培养基，能够极大提高转染效率。
6、转染所需的DNA或RNA需是高纯度、高质量的，可获得更高的转染效率。用于转染的质粒浓度在0.5-5μg/μL为宜，无内毒素、蛋白质、RNA或其他化学物质的污染。
7、培养基中的血清会影响脂质体复合物的形成，建议使用不含血清的Opti-MEM减血清培养基配置转染体系，细胞培养基中的血清不会影响转染效率。
如果需要筛选稳定转染的细胞株，建议在转染24h后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天更换为选择性培养基进行筛选。建议根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素和新霉素等。