Hoechst 34580是一种DNA染料，最大激发波长为368nm，最大发射波长为437nm。
Cas No.:23555-00-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Hoechst 34580是一种DNA染料，最大激发波长为368nm，最大发射波长为437nm[1]。Hoechst 34580结合于DNA小沟的A–T富集区，可对活细胞和固定细胞的DNA进行染色，并兼容免疫组织化学应用[2]。Hoechst 34580能够穿过血脑屏障，并以0.86µM的IC50值抑制Aβ42的聚集[3]。Hoechst 34580可用于开发一种检测恶性疟原虫感染红细胞的荧光蓝光光学系统[4]。
Fig. Fluorescence excitation and emission spectra of Hoechst 34580 bound to DNA
References:
[1] Selph K E. Enumeration of marine microbial organisms by flow cytometry using near‐UV excitation of Hoechst 34580‐stained DNA[J]. Limnology and Oceanography: Methods, 2021, 19(10): 692-701.
[2] Bucevičius J, Lukinavičius G, Gerasimaitė R. The use of hoechst dyes for DNA staining and beyond[J]. Chemosensors, 2018, 6(2): 18.
[3] Thai N Q, Tseng N H, Vu M T, et al. Discovery of DNA dyes Hoechst 34580 and 33342 as good candidates for inhibiting amyloid beta formation: in silico and in vitro study[J]. Journal of Computer-Aided Molecular Design, 2016, 30(8): 639-650.
基于Hoechst 34580的检测方法
本方案仅提供参考，应根据您的具体需要进行修改
1. 制备染色液
(1)配制储备液：在无水DMSO中配制浓度为1mM的Hoechst 34580原液。注意：将未使用的原液分装，-20°C避光保存，避免反复冻融。
(2)配制工作液：将原液用PBS稀释，配制浓度为1μM的工作液。请根据实际情况调整工作液的浓度，立即准备，避免反复冻融。注意：工作液必须在实验当天新鲜配制。
2. 细胞标记（贴壁细胞）
(1)将细胞培养在14mm玻璃底培养皿中，达到70-80%的细胞密度。
(2)添加0.05%胰酶-EDTA；37℃孵育3分钟，直至细胞聚集。轻敲培养皿，用2ml含有10% FBS的培养基淬灭蛋白酶。
(3)将细胞悬液转移至15ml管中；用2ml PBS冲洗培养皿以回收残留细胞。离心（1000g；4℃）5min；丢弃上层清液。
(4)用温热的PBS清洗两次。
(5)每块载玻片加入100μl工作溶液，在4°C低温下冰浴孵育20分钟。
(6)去除染料，用冷PBS洗涤2次，然后用PBS重悬以进行成像或流式细胞检测。
3. 细胞标记（悬浮细胞）
(1)收集1×106细胞，用冷PBS洗涤2次。
(2)重悬于1ml 1µM工作液中，室温20min，避光。
(3)洗涤2次（1000g; 4℃；3min），重悬于PBS中，用于成像或流式细胞分析。
4. 注意事项:
(1)荧光染料均存在淬灭问题。请尽量避光，以减缓荧光猝灭。
(2)为了您的安全和健康，请您在操作时穿工作服，戴一次性手套
(3) Hoechst 34580在整个实验过程中应避光保存。
(4)本方案及所有试剂仅供科学研究使用。
References:
[1] Abdollahi E, Taucher-Scholz G, Jakob B. Application of fluorescence lifetime imaging microscopy of DNA binding dyes to assess radiation-induced chromatin compaction changes[J]. International journal of molecular sciences, 2018, 19(8): 2399.
| Cas No. | 23555-00-2 | SDF | |
| 别名 | HOE 34580;Proamine;Hoechst-34580;Hoechst34580 | ||
| 化学名 | N,N-dimethyl-4-(6-(4-methylpiperazin-1-yl)-1H,3'H-[2,5'-bibenzo[d]imidazol]-2'-yl)aniline | ||
| Canonical SMILES | CN1CCN(C2=CC3=C(N=C(C4=CC5=C(N=C(C6=CC=C(N(C)C)C=C6)N5)C=C4)N3)C=C2)CC1 | ||
| 分子式 | C27H29N7 | 分子量 | 451.57 |
| 溶解度 | ≥ 6.46 mg/mL in DMSO, ≥ 15.87 mg/mL in Water with ultrasonic and warming | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.2145 mL | 11.0725 mL | 22.145 mL |
| 5 mM | 442.9 μL | 2.2145 mL | 4.429 mL |
| 10 mM | 221.4 μL | 1.1072 mL | 2.2145 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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