Hoechst 33258 analog

本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。

1、制备Hoechst染色液

(1) 配制Hoechst染料储存液: 使用DMSO溶解固体粉末，配置成10mg/mL的Hoechst染料储存液。

注意: Hoechst储存液建议分装后于-4℃或-20℃避光保存，避免反复冻融。

(2)工作液制备:使用预热的无血清培养基或缓冲液(如HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为10μg/mL的Hoechst工作液。

注意: 请根据实际情况调整 Hoechst 工作液浓度，现用现配。

2、细胞染色

2.1 悬浮细胞（以6孔板为例）

(1)悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。

(2)加入1mL的Hoechst染料工作液，室温避光孵育5-10 min分钟。

(3)孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。

(4)使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察。

2.2 贴壁细胞

(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。

(2)从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。

(3)从盖玻片的一角加入100μL的Hoechst染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，室温避光孵育5-15min分钟。

(4)吸弃染料工作液，使用培养液洗盖玻片2~3次，通过荧光显微镜进行观察。

3.显微镜检测：Hoechst 33258的激发/发射光分别为365⁄458nm。

注意事项：

①  对于固定的细胞或组织样品的染色，固定后需漂洗去除固定剂；

②  Hoechst 33258染色通常在其他染色后进行，如果不需要进行其它染色，则直接进行Hoechst 33258染色；

③  为减缓荧光淬灭，建议使用抗荧光淬灭封片剂；

④  荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光；

⑤  Hoechst 33258对人体有一定刺激性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

References:

[1]. K D Harshman, P B Dervan. Molecular recognition of B-DNA by Hoechst 33258. 1985 Jul 11;13(13):4825-35. doi: 10.1093/nar/13.13.4825.