Z-Ala-Ala-Asn-AMC（Cbz-Ala-Ala-Asn-AMC）是一种在被蛋白酶切割后可释放高荧光强度AMC的合成荧光肽底物（Ex/Em: 380nm/430nm），被广泛用于天冬酰胺内肽酶（Legumain）活性的测定。
Cas No.:149697-16-5
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
_1-3.$$$39978408@51.jpg');)
_1-9.$$$38538795@65.jpg');)
_1-9.$$$39112701@51.jpg');)
_1-7.$$$37316672@70.jpg');)
_366-372.$$$36198801@70.jpg');)
.$$$38565142@65.jpg');)
_1867-1883.$$$33248023@67.jpg');)
_eads6055.$$$39977546@45.jpg');)
_eadm9805.$$$40080571@45.jpg');)
_eadj3020.$$$39666821@45.jpg');)
_1-20.$$$39757301@28.jpg');)
_1-24.$$$38898113@28.jpg');)
_273-287.$$$36806353@46.jpg');)
_1-16.$$$37156877@44.jpg');)
_1-19.$$$37460805@44.jpg');)
_1291-1307.$$$34518654@46.jpg');)
Z-Ala-Ala-Asn-AMC (Cbz-Ala-Ala-Asn-AMC) is a synthetic fluorogenic peptide substrate that releases highly fluorescent AMC upon cleavage by proteases (Ex/Em: 380nm/430nm), which is widely used for the detection of asparaginyl endopeptidase (Legumain) activity[1,2,3]. Legumain is often overexpressed in tumors[4], and Z-Ala-Ala-Asn-AMC serves as a substrate suitable for detecting and quantifying legumain activity in biological samples, high-throughput inhibitor screening, and enzyme kinetics studies[5,6,7].
References:
[1] ZHAO T, LI Z, GUO Z, et al. Functional recombinant human Legumain protein expression in Pichia pastoris to enable screening for Legumain small molecule inhibitors[J]. Protein Expression and Purification, 2018, 150: 12-16.
[2] POREBA M. Recent advances in the development of legumain-selective chemical probes and peptide prodrugs[J]. Biological Chemistry, 2019, 400(12): 1529-1550.
[3] PICKERING A M, DAVIES K J A. A simple fluorescence labeling method for studies of protein oxidation, protein modification, and proteolysis[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2012, 52(2): 239-246.
[4] LIU C, SUN C, HUANG H, et al. Overexpression of legumain in tumors is significant for invasion/metastasis and a candidate enzymatic target for prodrug therapy[J]. Cancer Research, 2003, 63(11): 2957-2964.
[5] ZHAO T, LIU Y, HAO Y, et al. Esomeprazole inhibits the lysosomal cysteine protease legumain to prevent cancer metastasis[J]. Investigational New Drugs, 2021, 39(2): 337-347.
[6] POREBA M, SOLBERG R, RUT W, et al. Counter selection substrate library strategy for developing specific protease substrates and probes[J]. Cell Chemical Biology, 2016, 23(8): 1023-1035.
[7] GRUNCLOVA L, HORN M, VANCOVÁ M, et al. Two secreted cystatins of the soft tick Ornithodoros moubata: differential expression pattern and inhibitory specificity[J]. Biological Chemistry, 2006, 387(12).
Z-Ala-Ala-Asn-AMC（Cbz-Ala-Ala-Asn-AMC）是一种在被蛋白酶切割后可释放高荧光强度AMC的合成荧光肽底物（Ex/Em: 380nm/430nm），被广泛用于天冬酰胺内肽酶（Legumain）活性的测定[1,2,3]。Legumain是一种在肿瘤中常过度表达的酶[4]，Z-Ala-Ala-Asn-AMC作为底物适用于生物样本中豆苷活性的检测定量、高通量抑制剂筛选和酶动力学研究等领域[5,6,7]。
使用Z-Ala-Ala-Asn-AMC测定重组Legumain的活性[1]：
（1）取10μL Legumain（0.6mg/mL）分别与50μL不同活化缓冲液（含50mM乙酸钠和100mM NaCl，pH 4）混合，于37℃预孵育2h。
（2）随后用测定缓冲液（50mM MES，250mM NaCl，pH 5）将样品稀释至1ng/μL。
（3）加入30μL 150μM Z-Ala-Ala-Asn-AMC，使用酶标仪在380nm和430nm波长下测定酶活性。
（4）分别以每2min读取一次的方式，循环测定20次。酶活性单位定义为在37℃下每分钟释放1μM AMC所需的活性。
References:
[1] ZHAO T, LI Z, GUO Z, et al. Functional recombinant human Legumain protein expression in Pichia pastoris to enable screening for Legumain small molecule inhibitors[J]. Protein Expression and Purification, 2018, 150: 12-16.
| Cas No. | 149697-16-5 | SDF | |
| 别名 | Cbz-Ala-Ala-Asn-AMC | ||
| 分子式 | C28H31N5O8 | 分子量 | 565.58 |
| 溶解度 | Soluble in DMSO | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.7681 mL | 8.8405 mL | 17.681 mL |
| 5 mM | 353.6 μL | 1.7681 mL | 3.5362 mL |
| 10 mM | 176.8 μL | 884 μL | 1.7681 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.50% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet