furin酶活性检测[1-3]
本方案来自文献，请根据您的具体需求修改。
1.制备底物工作液
（1）配置储存液：使用DMSO溶解Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-AMC配置储存液。
注意:未使用的储存液分装后在-20°C或-80°C避光保存，避免反复冻融。
（2）配置工作液:使用反应缓冲液（含有0.2% Triton X-100, 2mM CaCl2, 0.02% sodium azide和1mg/ml BSA的100mM的HEPES缓冲液）稀释储存液。
注意：工作液现配现用，4 ℃或冰上短暂保存。
2.制备furin酶工作液：用反应缓冲液稀释furin酶。
3.准备一个96孔板。
空白孔:加入Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-AMC底物，浓度为10-20μM。
反应孔:加入Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-AMC底物与furin酶混合液，浓度分别为10-20μM和10-20nM。
抑制剂对照孔（验证特异性，可选）：furin酶与抑制剂混合液。
4. 96孔板37℃预孵育30min。
6.荧光分光光度计测量350-360nm激发下440-460nm处的荧光强度。
注意事项：
1）荧光底物存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Braun E, Hotter D, Koepke L, et al. Guanylate-Binding Proteins 2 and 5 Exert Broad Antiviral Activity by Inhibiting Furin-Mediated Processing of Viral Envelope Proteins. Cell Rep. 2019;27(7):2092-2104.e10.
[2] Shiryaev SA, Farhy C, Pinto A, et al. Characterization of the Zika virus two-component NS2B-NS3 protease and structure-assisted identification of allosteric small-molecule antagonists. Antiviral Res. 2017;143:218-229.
[3] Ma XR, Alugubelli YR, Ma Y, et al. MPI8 is Potent against SARS-CoV-2 by Inhibiting Dually and Selectively the SARS-CoV-2 Main Protease and the Host Cathepsin L. ChemMedChem. 2022;17(1):e202100456.
