A cell-
| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 | 操作 |
|---|---|---|---|---|
| 1mg | ¥5,880.00 | 现货 | 1 | |
| 100µg | ¥756.00 | 现货 | 1 | |
| 250µg | ¥1,652.00 | 现货 | 1 | |
| 500µg | ¥3,136.00 | 现货 | 1 |
DAF-
1.Kojima, H., Sakurai, K., Kikuchi, K., et al.Development of a fluorescent indicator for nitric oxide based on the fluorescein chromophoreChem. Pharm. Bull. (Tokyo)46(2)373-375(1998) 2.Nakatsubo, N., Kojima, H., Kikuchi, K., et al.Direct evidence of nitric oxide production from bovine aortic endothelial cells using new fluorescence indicators: DiaminofluoresceinsFEBS Lett.427(2)263-266(1998)
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1.制备染色液
(1)配置储存液:使用DMSO溶解DAF-2DA，配置浓度为1-10mM的储存液。
注意:未使用的储存液分装后在-20℃或-80°C避光保存，避免反复冻融。
(2)配置工作液:用合适的缓冲液(如:无血清和酚红的培养基或PBS)稀释储存液，配制浓度为1-10μM的工作液。
注意:
① 请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配。
② 酚红会干扰染料产生的荧光信号，请使用不含酚红的培养基配置染料工作液
2.细胞悬浮染色
(1)悬浮细胞：经4°C、1000g离心3-5分钟，弃去上清液，用PBS清洗两次，每次5分钟。
(2)贴壁细胞：使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
(3)加入DAF-2DA工作溶液重悬细胞，37 °C避光孵育0.5-1h。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(4)孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
(5)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
3.细胞贴壁染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4) 37 °C避光孵育0.5-1h。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(5)孵育结束后吸弃染料工作液，使用预温的培养液清洗盖玻片2~3次。
4.显微镜检测：DAF-2DA的最大激发/发射波长为485/538nm。
注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. Sanjoy Roychowdhury,et al. Oxidative stress in glial cultures: detection by DAF-2 fluorescence used as a tool to measure peroxynitrite rather than nitric oxide. 2002 Apr 15;38(2):103-14. doi: 10.1002/glia.10024.
