CY5-N3是一种结合了Cyanine5荧光染料与叠氮基团的功能性荧光探针（ex/em=646/662nm）。
Cas No.:1621101-43-6
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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CY5-N3 is a functional fluorescent probe that combines the Cyanine5 dye with an azido group (ex/em=646/662nm). CY5-N3 can specifically and covalently link to alkyne-bearing compounds via a click chemistry reaction, enabling efficient fluorescent labeling of biomolecules. CY5-N3 is used in biological imaging, molecular labeling and tracking, drug screening and development, and related fields[1-4].
References:
[1] Palsuledesai CC, Ochocki JD, Markowski TW, et al. A combination of metabolic labeling and 2D-DIGE analysis in response to a farnesyltransferase inhibitor facilitates the discovery of new prenylated proteins. Mol Biosyst. 2014 May;10(5):1094-103.
[2] Gao Z, Zhang E, Zhao H, et al. Bacteria-Mediated Intracellular Click Reaction for Drug Enrichment and Selective Apoptosis of Drug-Resistant Tumor Cells. ACS Appl Mater Interfaces. 2022 Mar 16;14(10):12106-12115.
[3] Sundin C, Zetterström CE, Vo DD, et al. Exploring resveratrol dimers as virulence blocking agents - Attenuation of type III secretion in Yersinia pseudotuberculosis and Pseudomonas aeruginosa. Sci Rep. 2020 Feb 7;10(1):2103.
[4] Lam YY, Tan A, Nowell CJ, et al. Systematic Investigation of Metabolic Oligosaccharide Engineering Efficiency in Intestinal Cells Using a Dibenzocyclooctyne-Monosaccharide Conjugate. Chembiochem. 2023 Jun 15;24(12):e202300144.
CY5-N3是一种结合了Cyanine5荧光染料与叠氮基团的功能性荧光探针（ex/em=646/662nm）。CY5-N3可通过点击化学反应与炔基化合物特异性共价连接，实现生物分子的高效荧光标记。CY5-N3可用于生物成像、分子标记与追踪以及药物筛选与研发等领域[1-4]。
基于活细胞的靶蛋白CY5-N3荧光标记与成像[1]
本实验方案根据研究内容整理，仅供参考，请根据实际需求进行调整。
1.探针孵育：将设计合成的小分子光亲和探针用DMSO配制成储备液。在细胞成像实验中，将HeLa细胞与探针（工作浓度通常为2μM）在37°C、5% CO₂条件下，于DMEM完全培养基中孵育2小时。孵育过程中，培养基中DMSO的终浓度不应超过1%。
2. 光交联与细胞固定：孵育结束后，吸弃培养基，用DMEM和PBS各洗涤细胞两次，以去除未结合的过量探针。将细胞置于冰上，用波长为365nm的UV光照射15-20分钟，使探针上的光反应基团（如脂肪族重氮啶）激活，并与靶蛋白形成共价交联。随后，用含3.7%多聚甲醛的DMEM在室温下固定细胞30分钟。
3.细胞透化与封闭：弃去固定液，用PBS洗涤细胞两次。用含0.1% Triton X-100的PBS溶液室温处理细胞10分钟，以增加细胞膜通透性。透化后，用PBS洗涤两次，再用含2% BSA和0.05% Tween-20的PBS溶液在室温下封闭30分钟，以降低非特异性结合。
4.点击化学标记：弃去封闭液，用PBS（含0.05% Tween-20）洗涤细胞两次。在细胞上加入新鲜配制的点击化学反应液，其最终组成为：CY5-N3（5μM）、TBTA（20μM）、TCEP（200μM）和CuSO₄（200μM），溶于PBS中，总体积为100μL。在室温下避光反应2小时。此铜催化的叠氮-炔环加成反应（CuAAC）将荧光染料CY5共价连接到已与靶蛋白交联的探针炔基上。
5.洗涤与核染色：反应结束后，依次用含0.05% Tween-20和0.5mM EDTA的PBS洗涤3次（每次10分钟），再用PBS洗涤2次（每次5分钟）。为标记细胞核，用含0.25mg/mL Hoechst 33258的PBS溶液室温避光孵育15分钟。最后，用PBS和去离子水各洗涤一次，即可进行封片和成像。
6.图像采集：使用共聚焦显微镜（如Zeiss LSM 510 Meta或Leica TCS SP5X系统）在相应的激发/发射波长下采集CY5（ex/em=646/662nm）通道的荧光图像。
注意事项：
（1）CY5-N3试剂对光敏感，操作时需避光。
（2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Su Y, Pan S, Li Z, et al. Multiplex imaging and cellular target identification of kinase inhibitors via an affinity-based proteome profiling approach. Sci Rep. 2015 Jan 12;5:7724.
| Cas No. | 1621101-43-6 | SDF | |
| 别名 | Sulfo-Cyanine5-azide | ||
| Canonical SMILES | CC1(C)/C(N(C2=CC=C(S(=O)(O)=O)C=C21)CCCCCC(NCCCN=[N+]=[N-])=O)=C\C=C\C=C\C(C(C)(C3=CC(S(=O)([O-])=O)=CC=C43)C)=[N+]4CC | ||
| 分子式 | C36H46N6O7S2 | 分子量 | 738.92 |
| 溶解度 | DMSO : 25 mg/mL (33.83 mM) | 储存条件 | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.3533 mL | 6.7666 mL | 13.5333 mL |
| 5 mM | 270.7 μL | 1.3533 mL | 2.7067 mL |
| 10 mM | 135.3 μL | 676.7 μL | 1.3533 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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