AF488 NHS ester是一种胺特异性荧光探针，最佳激发波长为488nm，发射波长为525nm。
Cas No.:1374019-99-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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AF488 NHS ester is an amine-specific fluorescent probe with optimal excitation wavelength of 488nm and the emission wavelength of 525nm[1]. AF488 NHS ester is pH-sensitive and emits fluorescence at low pH values, which can be used to detect the entry of nanoparticles into lysosomes with low pH levels[2]. AF488 NHS ester can be used to label viruses for tracking virus-cell interactions[3]. AF488 NHS ester can be used to prepare antibodies against Staphylococcus aureus(S. aureus), thereby establishing a S. aureus detection method based on fluorescence immunosorbent assay[4].
References:
[1] Kendall C G, Stockton A M, Leicht S, et al. Amine analysis using AlexaFluor 488 succinimidyl ester and capillary electrophoresis with laser‐induced fluorescence[J]. Journal of Analytical Methods in Chemistry, 2015, 2015(1): 368362.
[2] Vaughan H J, Est-Witte S, Dockery L T, et al. A high-throughput lysosome trafficking assay guides ligand selection and elucidates differences in CD22-targeted nanodelivery[J]. Science and Technology of Advanced Materials, 2024, 25(1): 2351791.
[3] Zhang S L X, Tan H C, Hanson B J, et al. A simple method for Alexa Fluor dye labelling of dengue virus[J]. Journal of virological methods, 2010, 167(2): 172-177.
[4] Kim J K, Yun H Y, Kim J S, et al. Development of fluorescence-linked immunosorbent assay for rapid detection of Staphylococcus aureus[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2024, 108(1): 2.
AF488 NHS ester是一种胺特异性荧光探针，最佳激发波长为488nm，发射波长为525nm[1]。AF488 NHS ester具有pH敏感性，在低pH值时发出荧光，可用于检测纳米颗粒进入低pH值溶酶体的过程[2]。AF488 NHS ester可用于标记病毒，以追踪病毒与细胞的相互作用[3]。AF488 NHS ester可用于制备针对金黄色葡萄球菌（S. aureus）的抗体，从而建立基于荧光免疫吸附法的金黄色葡萄球菌检测方法[4]。
基于AF488 NHS ester的检测方法
本方案仅提供了一种指导原则，具体操作需根据您的实际需求进行调整。
1. 准备染色溶液
（1）制备标准溶液：用高质量无水二甲基亚砜（DMSO）配制浓度为1mM的AF488 NHS ester标准溶液。注意：将未用完的标准溶液分装并存放在避光条件下于-20°C下保存，以避免反复冻融。
（2）制备工作溶液：用合适的缓冲液（如PBS）将标准溶液稀释，配制浓度为1μM的工作溶液。请根据实际情况调整工作液的浓度，并立即准备，以避免反复冻融。注意：工作溶液必须在实验当天新鲜配制。
2. 蛋白质制备
（1）使用离心过滤器或脱盐柱将蛋白质转移到0.1M的NaHCO3缓冲液（pH 8.3）中。
（2）在280nm波长处测量吸光度，并计算浓度，然后将AF488 NHS ester与蛋白质以3:1的摩尔比混合（染料：蛋白质），使每份蛋白质中染料含量为0.8-1.0μg。
（3）在黑暗中于室温下轻轻搅拌孵育1小时。
3. 淬火与检测
（1）向每100μl反应体积中加入10µl 1M的Tris（pH 8.0），并孵育15分钟。
（2）通过凝胶过滤或离心脱盐（在事先用 PBS 预平衡的条件下）去除未反应的染料，并通过流式细胞技术进行测量。
4. 注意事项：
（1）所有荧光染料都存在猝灭问题。请尽可能避免光照，以减缓荧光猝灭现象的发生。
（2）为了您的安全与健康，请在操作时穿戴实验服和一次性手套。
（3）AF488 NHS ester在整个实验过程中都应存放在黑暗环境中。
（4）保持反应溶液的pH值在8.0-8.5之间；较低的pH值会减缓偶联反应，较高的pH值则会增加水解反应。
（5）本实验方案及所有试剂仅供科学研究使用。
References:
[1] Wang J, Bhattacharyya J, Mastria E, et al. A quantitative study of the intracellular fate of pH-responsive doxorubicin-polypeptide nanoparticles[J]. Journal of Controlled Release, 2017, 260: 100-110.
| Cas No. | 1374019-99-4 | SDF | |
| 分子式 | C31H32N4O13S2 | 分子量 | 732.74 |
| 溶解度 | good in water, DMF, DMSO | 储存条件 | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.3647 mL | 6.8237 mL | 13.6474 mL |
| 5 mM | 272.9 μL | 1.3647 mL | 2.7295 mL |
| 10 mM | 136.5 μL | 682.4 μL | 1.3647 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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- Purity: >98.00% Appearance: A solid
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- SDS (Safety Data Sheet)
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