5-FAM (5-Carboxyfluorescein)

目录号: GC30102纯度: >97.00%同义词: 5-羧基荧光素; 5-Carboxyfluorescein
5-FAM (5-Carboxyfluorescein)是一种单一异构体形式的绿色荧光探针,被广泛用于标记肽、蛋白质和核苷酸,Ex/Em为490nm/520nm。

5-FAM (5-Carboxyfluorescein)
Cas No.: 76823-03-5
规格价格库存数量操作
100mg¥420.00现货
1
500mg¥840.00现货
1
1g¥1,344.00现货
1
10mM (in 1mL DMSO)¥462.00现货
1

文献被引

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  • Nature cover
    Nature
    641, 529–536 (2025)
  • Nature cover
    Nature
    628, 630–638 (2024)
  • Nature cover
    Nature
    632, 686–694 (2024)
  • Nature cover
    Nature
    618, 1017–1023 (2023)
  • Nature cover
    Nature
    610, 366–372 (2022)
  • Cell cover
    Cell
    187(9):2288-2304 (2024)
  • Cell cover
    Cell
    183(7):1867-1883 (2020)
  • Science cover
    Science
    388(6745) (2025)
  • Science cover
    Science
    387(6739) (2025)
  • Science cover
    Science
    387(6734) (2025)
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    Cell Research
    35, 97–116 (2025)
  • Cell Research cover
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    34, 683–706 (2024)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    33, 273–287 (2023)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    33, 546–561 (2023)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    33, 904–922 (2023)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    31, 1291–1307 (2021)

产品描述 Description

5-FAM (5-Carboxyfluorescein) is a green fluorescent probe in the form of a single isomer, widely used for labeling peptides, proteins, and nucleotides, with Ex/Em of 490nm/520nm[1]. The single-isomer form of 5-FAM ensures consistent and predictable fluorescence signals, making it suitable for applications such as real-time quantitative PCR (qPCR), fluorescence in situ hybridization (FISH), and fluorescence resonance energy transfer (FRET)[2,3,4].

References:
[1] TOKMINA-ROSZYK M, TOKMINA-ROSZYK D, FIELDS G B. The synthesis and application of Fmoc-Lys (5-Fam) building blocks[J]. Peptide Science, 2013, 100(4): 347-355.
[2] LEE J, SAMSON A A, SONG J M. Peptide substrate-based inkjet printing high-throughput MMP-9 anticancer assay using fluorescence resonance energy transfer (FRET)[J]. Sensors and Actuators B: Chemical, 2018, 256: 1093-1099.
[3] TIMKEN M D, SWANGO K L, ORREGO C, et al. A duplex real-time qPCR assay for the quantification of human nuclear and mitochondrial DNA in forensic samples: implications for quantifying DNA in degraded samples[J]. Journal of Forensic Sciences, 2005, 50(5): JFS2004423-17.
[4] TORIMURA M, KURATA S, YAMADA K, et al. Fluorescence-quenching phenomenon by photoinduced electron transfer between a fluorescent dye and a nucleotide base[J]. Analytical Sciences, 2001, 17(1): 155-160.

5-FAM (5-Carboxyfluorescein)是一种单一异构体形式的绿色荧光探针,被广泛用于标记肽、蛋白质和核苷酸,Ex/Em为490nm/520nm[1]。5-FAM单一异构体形式确保了荧光信号的一致性和可预测性,适用于实时定量PCR(qPCR)、荧光原位杂交(FISH)和荧光共振能量转移(FRET)等领域[2,3,4]

实验参考方法 Experimental Reference Method

使用5-FAM标记肽的实验操作[1]

(1)在固相载体上合成目标肽链后,先用含2%水合肼的DMF溶液去除Dde保护基,再进行染料标记;

(2)通过2-(1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)/N-羟基苯并三氮唑(HOBt)偶联试剂预活化5-FAM的羧基,使其与树脂上的肽链发生偶联;

(3)使用三氟乙酸(TFA)将肽-染料复合物从固相载体上裂解,并同步去除侧链保护基,最终通过高效液相色谱(HPLC)纯化产物,并采用电喷雾电离质谱(ESI-MS)及光谱学方法进行表征。

溶液配制:

(1)工作液:用DMSO溶解5-FAM,过滤除菌;

使用5-FAM标记蛋白质的实验步骤:

(1)蛋白准备:将蛋白溶解在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)和铵离子的pH 8.5缓冲液中,浓度配制为2-10mg/mL,以获得最佳标记效率。若pH低于8.0,用1M碳酸氢钠进行调整。

(2)5-FAM工作液用量计算:标记反应所需的5-FAM(MW = 376.32)用量取决于要标记蛋白的用量,5-FAM染料与蛋白的最佳摩尔比为10:1左右。

(3)标记反应:取算好体积的5-FAM工作液缓慢加入到蛋白样品溶液中,轻轻摇匀混合,然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀,以防蛋白样品变性失活。

(4)孵育反应:将反应小管置于避光处,在室温条件下轻轻摇晃孵育60min。每隔10-15min,将反应小管轻轻颠倒几次,以充分混合两种反应物,提高标记效率。

References:

[1] SHEN D, LIANG K, YE Y, et al. Modulation of nuclear internalization of Tat peptides by fluorescent dyes and receptor-avid peptides[J]. FEBS letters, 2007, 581(9): 1793-1799.

产品文档 Product Documents

Purity:>97.00%

化学性质Chemical Properties

CAS 号
76823-03-5
同义词
5-羧基荧光素; 5-Carboxyfluorescein
SMILES
O=C1OC2(C3=C(OC4=C2C=CC(O)=C4)C=C(O)C=C3)C5=C1C=C(C(O)=O)C=C5
分子式
C21H12O7
分子量
376.32 g/mol
溶解性
DMSO : ≥ 31 mg/mL (82.38 mM)
保存条件
Store at -20°C
General tips
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。
为了提高溶解度,请将管子加热至 37°C,然后在超声波浴中震荡一段时间。
Shipping Condition
评估样品解决方案:配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸:配备 RT,或根据请求配备蓝冰。

计算工具摩尔浓度 / 稀释 / 分子量 / 单位换算 / 体内配方 / 溶解度

g/mol