5-FAM (5-Carboxyfluorescein)是一种单一异构体形式的绿色荧光探针，被广泛用于标记肽、蛋白质和核苷酸，Ex/Em为490nm/520nm。
Cas No.:76823-03-5
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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5-FAM (5-Carboxyfluorescein) is a green fluorescent probe in the form of a single isomer, widely used for labeling peptides, proteins, and nucleotides, with Ex/Em of 490nm/520nm[1]. The single-isomer form of 5-FAM ensures consistent and predictable fluorescence signals, making it suitable for applications such as real-time quantitative PCR (qPCR), fluorescence in situ hybridization (FISH), and fluorescence resonance energy transfer (FRET)[2,3,4].
References:
[1] TOKMINA-ROSZYK M, TOKMINA-ROSZYK D, FIELDS G B. The synthesis and application of Fmoc-Lys (5-Fam) building blocks[J]. Peptide Science, 2013, 100(4): 347-355.
[2] LEE J, SAMSON A A, SONG J M. Peptide substrate-based inkjet printing high-throughput MMP-9 anticancer assay using fluorescence resonance energy transfer (FRET)[J]. Sensors and Actuators B: Chemical, 2018, 256: 1093-1099.
[3] TIMKEN M D, SWANGO K L, ORREGO C, et al. A duplex real-time qPCR assay for the quantification of human nuclear and mitochondrial DNA in forensic samples: implications for quantifying DNA in degraded samples[J]. Journal of Forensic Sciences, 2005, 50(5): JFS2004423-17.
[4] TORIMURA M, KURATA S, YAMADA K, et al. Fluorescence-quenching phenomenon by photoinduced electron transfer between a fluorescent dye and a nucleotide base[J]. Analytical Sciences, 2001, 17(1): 155-160.
5-FAM (5-Carboxyfluorescein)是一种单一异构体形式的绿色荧光探针，被广泛用于标记肽、蛋白质和核苷酸，Ex/Em为490nm/520nm[1]。5-FAM单一异构体形式确保了荧光信号的一致性和可预测性，适用于实时定量PCR（qPCR）、荧光原位杂交（FISH）和荧光共振能量转移（FRET）等领域[2,3,4]。
使用5-FAM标记肽的实验操作[1]：
（1）在固相载体上合成目标肽链后，先用含2%水合肼的DMF溶液去除Dde保护基，再进行染料标记；
（2）通过2-(1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯（HBTU）/N-羟基苯并三氮唑（HOBt）偶联试剂预活化5-FAM的羧基，使其与树脂上的肽链发生偶联；
（3）使用三氟乙酸（TFA）将肽-染料复合物从固相载体上裂解，并同步去除侧链保护基，最终通过高效液相色谱（HPLC）纯化产物，并采用电喷雾电离质谱（ESI-MS）及光谱学方法进行表征。
溶液配制：
（1）工作液：用DMSO溶解5-FAM，过滤除菌；
使用5-FAM标记蛋白质的实验步骤：
（1）蛋白准备：将蛋白溶解在不含伯胺（如Tris或甘氨酸）和铵离子的pH 8.5缓冲液中，浓度配制为2-10mg/mL，以获得最佳标记效率。若pH低于8.0，用1M碳酸氢钠进行调整。
（2）5-FAM工作液用量计算：标记反应所需的5-FAM（MW = 376.32）用量取决于要标记蛋白的用量，5-FAM染料与蛋白的最佳摩尔比为10：1左右。
（3）标记反应：取算好体积的5-FAM工作液缓慢加入到蛋白样品溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀，以防蛋白样品变性失活。
（4）孵育反应：将反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育60min。每隔10-15min，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合两种反应物，提高标记效率。
References:
[1] SHEN D, LIANG K, YE Y, et al. Modulation of nuclear internalization of Tat peptides by fluorescent dyes and receptor-avid peptides[J]. FEBS letters, 2007, 581(9): 1793-1799.
| Cas No. | 76823-03-5 | SDF | |
| 别名 | 5-羧基荧光素; 5-Carboxyfluorescein | ||
| Canonical SMILES | O=C1OC2(C3=C(OC4=C2C=CC(O)=C4)C=C(O)C=C3)C5=C1C=C(C(O)=O)C=C5 | ||
| 分子式 | C21H12O7 | 分子量 | 376.32 |
| 溶解度 | DMSO : ≥ 31 mg/mL (82.38 mM) | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.6573 mL | 13.2866 mL | 26.5731 mL |
| 5 mM | 531.5 μL | 2.6573 mL | 5.3146 mL |
| 10 mM | 265.7 μL | 1.3287 mL | 2.6573 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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