2-Di-1-ASP

本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、制备染色液
（1）染料储存液:使用DMSO将2-Di-1-ASP溶解成1-5mM的储存液。配置好的储存液分装后于-20或-80℃避光保存。
（2）染料工作液:用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1-5μM的2-Di-1-ASP工作液。
注意: 请根据实际情况调整及优化工作液浓度，现用现配。
2、细胞悬浮染色(以6 孔板为例)
（1）悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。
（2）贴壁细胞使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
（3）加入1mL染料工作液重悬细胞，室温避光孵育15-30min分钟，不同细胞最佳培养时间不同。
（4）孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
（5）使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察。
3、细胞贴壁染色
（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）从盖玻片的一角加入100μL染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，室温避光孵育15-30min分钟。
（4）吸弃染料工作液，使用培养液清洗盖玻片2~3次，每次5分钟。
4、显微镜检测：2-Di-1-ASP的最大激发光/发射光为485/607nm。

注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1].Yu-Meng Wang, et, al. MeCP2 duplication causes hyperandrogenism by upregulating LHCGR and downregulating RORα. 2021 Oct 25;12(11):999. doi: 10.1038/s41419-021-04277-4.