TRIzol试剂是一种可以从动物和植物样本中提取RNA的产品。
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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TRIzol试剂是一种可以从动物和植物样本中提取RNA的产品。在TRIzol试剂的作用下，样本可以完全裂解。在样品均质或裂解过程中，它能够保持RNA的完整性，同时溶解细胞并溶解细胞内容物。 TRIzol试剂具有强大的广谱性，并可应用于从各种样品中提取总RNA。提取过程方便快捷，整个操作可以在一个小时内完成。该试剂可用于小样本（50-100毫克组织、1x106个细胞），也适用于大样本（≥1克组织、＞107个细胞）。它适用于人类、动物、植物组织和细菌，并且可以同时处理大量不同类型的样品，在一个小时内完成整个提取过程。分离出来的总RNA蛋白质和DNA极低污染，并可用于Northern Blot、反转录、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和基因克隆等实验研究。
自备试剂
氯仿，异丙醇，70％乙醇（DEPC 水配置），无 Rnase 的 H2O。
Ⅰ实验前准备
RNA 制备的关键是要抑制细胞中的 RNA 分解酶和防止所用器具及试剂中的 RNA 分解酶的污染。因此，在实验中必须采取以下措施：
戴一次性干净手套；使用 RNA 操作专用实验台；在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的 RNA分解酶的污染。
注意事项：
1. 尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前用 0.1%DEPC 水溶液在 37°C 处理 12h，然后在 120°C 高压灭 30min 以除去残留的 DEPC。
2. 用于 RNA 实验的试剂，须使用干热灭菌（180°C，60min）或使用上述方法进行 DEPC 水处理灭菌后的玻璃容器盛装（也可以使用 RNA 实验用的一次性塑料容器)，使用的无菌水须用 0.1%的 DEPC 处理后再进行高温高压灭菌。
3. RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。
Ⅱ 实验操作
TRIzol 试剂的用法如下
|
样品类型 |
样品规格 |
TRIzol 用量 |
|
贴壁培养细胞 |
10 cm2 |
1 mL |
|
悬浮培养细胞 |
1x106-10x106 |
1 mL |
|
普通组织样本（肌肉等） |
50-100 mg |
1 mL |
|
特殊组织样品（脾，肝脏等） |
30-50 mg |
1-2 mL |
|
植物组织 |
30-50 mg |
1 mL |
|
白细胞 |
1x106 |
1 mL |
样品规格 和 RNA 产量
|
样品类型 |
样品规格 |
RNA 产量 |
|
白细胞 |
1x106 |
10~20 μg |
|
植物组织 |
25 mg |
10~20 μg |
|
细胞 |
1x106 |
8~15 μg |
|
肌肉/脑等组织 |
50 mg |
10~25 μg |
|
肝脏 |
50 mg |
100~300 μg |
TRIzol 使用说明
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贴壁培养细胞 |
悬浮细胞，酵母，细菌 |
动物和植物组织 |
|
|
1. 样品预处理 |
从每 10 cm2的培养细胞中倒出培养液，并用 PBS 洗涤一次，以除去尽可能多的过量溶液。 |
将悬浮培养的细胞与培养液一起倒入离心管中，以 8,000 rpm 离心 2 分钟，弃去上清液，然后加入 50μl 无菌水重悬细胞，直到没有明显的沉淀为止。 |
将样品转移到用液氮预冷却的研钵中，用杵研磨组织，并在此期间连续添加液氮，直到将其研磨成粉末。 |
|
2. 加入TRIzol |
加入 1 ml 的TRIzol，使裂解物均匀地分布在细胞表面，然后使用移液器吹干细胞。 将细胞裂解液转移至1.5ml EP管中。 |
加入 1ml TRIzol。 |
将磨碎的组织添加到含有 1 ml TRIzol 的 1.5 ml EP 管中。 |
|
3. 裂解样品 |
加入 TRIzol 后，立即用腕力将其翻转过来，直到细胞和组织粉末均匀分散而没有结块。 在室温下放置5分钟，以完全分离核酸-蛋白质复合物。 |
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|
4. 加入氯仿 |
加入 200μl 氯仿，用手腕剧烈摇晃 15 秒钟，然后在室温下放置 2 分钟。 |
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5. 离心分层 |
以 13,000 rpm 离心 10 分钟，然后将600μl 无色上清液转移至新的 1.5EP 管中。 |
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6. 加入异丙醇 |
向上述 600μl 上清液中加入 600μl 异丙醇，用手腕将其上下颠倒几次，然后在-20°C 下放置 5 分钟。 |
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|
7. 离心总RNA |
以 13,000 rpm 离心 10 分钟，小心丢弃上清液，并保存底部总 RNA 沉淀。 |
||
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8. 冲洗总RNA |
向沉淀的每个试管中加入 1ml 70％乙醇，上下颠倒数次，然后以 13,000 rpm 离心 5 分钟。 小心丢弃上清液并保存底部 RNA 沉淀。 |
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9. 再重复冲洗一次 |
重复步骤 8 ，然后再次洗涤。 |
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10. 挥发性残留乙醇 |
倒掉洗液，再次短离心 10s 后，用 10 μl Tip 头吸干剩余的洗液，置于室温使乙醇挥发干净（～20min）。 |
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11. 溶解总RNA |
每管加入 20～100 μl TE Buffer 或 RNase Free H2O 溶解总 RNA。 |
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常见问题
1. 提取率低。可能的原因：（a. 样品裂解或匀浆处理不彻底； b. RNA 沉淀未完全溶解）。
2. A260/A280<1.65。可能原因：（a. 检测吸光度时，RNA 样品没有溶于水，而溶于了 TE 中；b. 样品匀浆时加的组织量过多；c. 分层后，吸取上清液不足 500 μl ；d. 吸取水相时混入了有机相）。
3. DNA 污染过多。可能原因：（a. 样品匀浆时加的试剂量太少或组织量过多；b. 样品中含有有机溶剂）。
| 应用&特点 | • 允许从同一样品中分离 RNA，DNA 和蛋白质
• 提供出色的裂解能力，即使样品类型复杂 • 针对组织，细胞，血清，病毒和细菌的优化配方和方案 |
| 运输方式 | Ship with blue ice. |
| 储存条件 | Store at 2-8°C,protected from light for 2 years. |
| 用途 | 仅供研究使用!不能用于人体。 |
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