Real Thiol（RT）是一种基于可逆反应的荧光探针，可以定量实时监测活细胞中的谷胱甘肽（GSH）动态。
Cas No.:2280796-90-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Real Thiol (RT) is a reversible reaction-based fluorescent probe that can quantitatively monitor the real-time glutathione (GSH) dynamics in living cells. Real Thiol and its GSH adduct (RT-GSH) shows fluorescence maxima at 487 and 562nm with excitation wavelengths at 405 and 488nm, respectively. The binding rate constant (Kon) of the reaction between Real Thiol and GSH is 7.5M−1s−1, the dissociation constant (Koff) is 0.0203s−1, and the equilibrium dissociation constant (Kd) is 3.7mM. Real Thiol exhibits a wide dynamic range of proportional fluorescence response when reacting with glutathione, enabling the monitoring of GSH level changes in live cells within the 1-10mM range. Real Thiol is a versatile tool that can be used for both confocal microscopy and flow cytometry based high-throughput quantification of glutathione levels in single cells[1].
References:
[1] Jiang X, Chen J, Bajić A, et al. Quantitative real-time imaging of glutathione. Nat Commun. 2017;8:16087.
Real Thiol（RT）是一种基于可逆反应的荧光探针，可以定量实时监测活细胞中的谷胱甘肽（GSH）动态。Real Thiol及其GSH加合物（RT-GSH）分别在487和562nm处显示最大荧光，其激发波长分别为405和488nm。Real Thiol与GSH反应的结合速率常数（Kon）为7.5M−1s-1，解离常数（Koff）为0.0203s−1，平衡解离常数（Kd）为3.7mM。Real Thiol与谷胱甘肽反应时显示出具有宽动态范围的比例荧光响应，可在活细胞中监测1-10mM范围内的GSH水平变化。Real Thiol是一种多功能工具，可用于共聚焦显微镜和基于流式细胞术的单细胞中谷胱甘肽水平的高通量定量[1]。
本方案来自文献，请根据您的具体需求修改[1][2]。
1.制备染料工作液
（1）配置储存液：使用DMSO溶解Real Thiol，配置成10mM的储存液。
注意:未使用的储存液分装后在-20°C或-80°C避光保存，避免反复冻融。
（2）配置工作液：使用无血清的培养基，如OptiMEM稀释到1µM。
注意：工作液现配现用，4 ℃或冰上避光短暂保存。
2.细胞悬浮染色
(1)悬浮细胞：经4°C、1000g离心3-5分钟，弃去上清液，用PBS清洗两次，每次5分钟。
(2)贴壁细胞：使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5分钟。
(3)加入1µM 的Real Thiol工作溶液重悬细胞，37°C避光孵育5-15分钟。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(4)孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
(5)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
3.细胞贴壁染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL的终浓度为1µM染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4) 37°C避光孵育5-15分钟。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(5)孵育结束后吸弃染料工作液，使用预温的培养液清洗盖玻片2~3次，通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Oberstadt M, Stieler J, Simpong DL, et al. TDP-43 self-interaction is modulated by redox-active compounds Auranofin, Chelerythrine and Riluzole. Sci Rep. 2018;8(1):2248.
[2] Mendiola AS, Ryu JK, Bardehle S, et al. Transcriptional profiling and therapeutic targeting of oxidative stress in neuroinflammation. Nat Immunol. 2020;21(5):513-524.
| Cas No. | 2280796-90-7 | SDF | |
| Canonical SMILES | O=C1OC2=CC(N3CCC3)=CC=C2C=C1/C=C(C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)=O)\C#N | ||
| 分子式 | C20H17N3O7 | 分子量 | 411.36 |
| 溶解度 | DMSO : ≥ 101 mg/mL (245.53 mM) | 储存条件 | Store at 2-8°C,protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.431 mL | 12.1548 mL | 24.3096 mL |
| 5 mM | 486.2 μL | 2.431 mL | 4.8619 mL |
| 10 mM | 243.1 μL | 1.2155 mL | 2.431 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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