QTZ

QTZ用于活体免疫生物发光成像^[1]

本实验方案根据研究内容整理，仅供参考，请根据实际需求进行调整。

1. 试剂准备：QTZ溶解于活体注射缓冲液中，配制成适宜浓度的储备液（可溶解至~2mM）。

2. 配对酶准备：制备与QTZ配对的琥珀光发射突变荧光素酶QLuc，如通过腺相关病毒（AAV）系统携带肝脏特异性TBG启动子驱动的QLuc表达基因，或构建并表达纯化QLuc与靶向抗体片段（如抗Her2 scFv）的融合蛋白。

3. 动物模型与标记：对于免疫生物发光成像（ImmunoBLI），在异种移植小鼠模型中接种AkaLuc标记的肿瘤细胞。通过尾静脉注射表达QLuc（或scFv-QLuc融合蛋白）的AAV，或将纯化的scFv-QLuc融合蛋白通过尾静脉注射至荷瘤小鼠体内。

4. 成像操作：待QLuc在目标组织（如肝脏）中表达或scFv-QLuc融合蛋白在体内循环富集后，通过腹腔注射（i.p.）或静脉注射（i.v.）方式给予小鼠QTZ（0.1μmol）。

5. 信号采集：使用配备适当滤光片（可考虑使用600-700nm的远红滤光片以减少背景干扰）的冷CCD相机或生物发光成像系统，在麻醉状态下对小鼠进行活体成像，采集QLuc-QTZ反应发出的琥珀色光（发射峰约585nm）。

注意事项：

（1）QLuc-QTZ荧光素酶-荧光素对发射红移光（峰值约585nm），超过52%的总发射光波长在600nm以上，提高了活体深层组织成像的组织穿透能力和信噪比。

（2）QTZ在水中的溶解度约为62.5-125μM，在活体注射缓冲液中溶解度可达~2mM。

（3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

References:

[1] Xiong Y, Zhang Y, Li Z, et al. Engineered Amber-Emitting Nano Luciferase and Its Use for Immunobioluminescence Imaging In Vivo. J Am Chem Soc. 2022 Aug 10;144(31):14101-14111.