Phallacidin是一种来源于毒蘑菇的双环七肽毒素。Phallacidin通过高亲和力结合丝状肌动蛋白(F-actin)来稳定微丝结构并抑制肌动蛋白解聚，从而破坏细胞骨架动态平衡。
Cas No.:26645-35-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Phallacidin is a bicyclic heptapeptide toxin derived from poisonous mushrooms. Phallacidin stabilizes microfilament structures and inhibits actin depolymerization by binding with high affinity to filamentous actin (F-actin), thereby disrupting cytoskeletal dynamics. Phallacidin can be used for cytoskeleton visualization research, fluorescent probe development, and studies on microfilament dynamics mechanisms[1-4].
References:
[1] Schmid E, Gu S, Yang W, et al. Serum- and glucocorticoid-inducible kinase SGK1 regulates reorganization of actin cytoskeleton in mast cells upon degranulation. Am J Physiol Cell Physiol. 2013 Jan 1;304(1):C49-55.
[2] Franzén LE. The perforated mesentery of the rat: a novel model for the study of genuine connective tissue contraction. J Surg Res. 1996 Jan;60(1):91-100.
[3] Carley WW, Barak LS, Webb WW. F-actin aggregates in transformed cells. J Cell Biol. 1981 Sep;90(3):797-802.
[4] Hinshaw DB, Sklar LA, Bohl B, et al. Cytoskeletal and morphologic impact of cellular oxidant injury. Am J Pathol. 1986 Jun;123(3):454-64.
Phallacidin是一种来源于毒蘑菇的双环七肽毒素。Phallacidin通过高亲和力结合丝状肌动蛋白(F-actin)来稳定微丝结构并抑制肌动蛋白解聚，从而破坏细胞骨架动态平衡。Phallacidin可用于细胞骨架可视化研究、荧光探针开发和微丝动力学机制研究[1-4]。
Phallacidin用于荧光标记F-肌动蛋白细胞骨架的实验方案[1]
本实验方案根据研究内容整理，仅供参考，请根据实际需求进行调整。
1.试剂准备：
（1）Phallacidin合成NBD-Phallacidin：通过Phallacidin与乙二胺反应将其转化为酰胺。含有一级胺的该衍生物随后与4-氯-7-硝基苯-2-恶唑-1,3-二唑(NBD-Cl)在无水甲醇中混合。随后反应生成荧光衍生物NBD-Phallacidin。通过醚沉淀法对标记和未标记的Phallacidin进行部分纯化。
（2）NBD-Phallacidin 储备液：将经SP-Sephadex色谱纯化的NBD-Phallacidin溶于适当的缓冲液（如磷酸盐缓冲液或Hanks‘平衡盐溶液）或细胞培养基中，配制成工作液。用于固定细胞染色的部分纯化制品中NBD-Phallacidin含量约为20%，工作浓度约为0.9-1.7μg/mL。用于活细胞染色的纯化NBD- Phallacidin工作浓度约为14-57ng/mL或5.7-8.6μg/mL。
（3）缓冲液与培养基：磷酸盐缓冲盐水（PBS）；Hanks‘平衡盐溶液（HBSS）；高葡萄糖缓冲液A（120mM NaCl，15mM 葡萄糖，10mM Hepes，4.4mM NaHCO₃，3mM KCl，1mM Na₂PO₄，pH 7.1）；Dulbecco改良Eagle培养基（含10%胎牛血清）。
2.细胞固定与染色：
（1）细胞固定：将生长于盖玻片上的细胞在22°C下用2%甲醛（溶于PBS）固定20分钟。
（2）透化处理：用PBS洗涤两次后，用预冷的丙酮（-20°C）提取7-10分钟，然后空气干燥。
（3）染色：在盖玻片上加入350μL含有0.3-0.6μg NBD-Phallacidin的PBS或HBSS，染色5-30分钟。
（4）洗涤与观察：用4°C缓冲液洗涤四次以去除未结合毒素，随后进行荧光显微观察。
3.活体动物细胞染色流程
（1）细胞透化：采用溶血卵磷脂透化法。用含14-40μg/mL棕榈酰溶血卵磷脂的高葡萄糖缓冲液A处理细胞2分钟。
（2）缓冲液体系：用高葡萄糖缓冲液A洗涤细胞四次以去除溶血卵磷脂。加入350μL含5ng NBD-Phallacidin的缓冲液A，室温染色5分钟。染色后用缓冲液A洗涤三次，在1小时内观察。
（3）培养基体系：用高葡萄糖缓冲液A洗涤细胞一次。加入含2-3μg NBD-Phallacidin的Dulbecco改良培养基（含10%胎牛血清），在37°C孵箱中染色5分钟。随后将细胞转移至预热的完全培养基中继续培养。
（4）活力检测：可使用荧光素二乙酸酯染色法评估细胞膜完整性和活力。
注意事项：
（1）该方法可用于标记多种已知的F-肌动蛋白结构，包括应力纤维、皱褶缘、细胞穹顶、与膜相关的弥散性肌动蛋白以及藻类中的肌动蛋白电缆。细胞核不被染色。
（2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Barak LS, Yocum RR, Nothnagel EA, et al. Fluorescence staining of the actin cytoskeleton in living cells with 7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazole-phallacidin. Proc Natl Acad Sci U S A. 1980 Feb;77(2):980-4.
| Cas No. | 26645-35-2 | SDF | |
| 别名 | 羧基二羟鬼笔毒肽 | ||
| Canonical SMILES | O=C1[C@@]([H])(NC([C@]([C@H](O)C(O)=O)([H])NC([C@H](C(C)C)NC([C@@H]2CC(C)(O)CO)=O)=O)=O)CSC(NC3=C4C=CC=C3)=C4C[C@@H](C(N2)=O)NC([C@H](C)NC([C@@]5([H])N1C[C@@H](O)C5)=O)=O | ||
| 分子式 | C37H50N8O13S | 分子量 | 846.9 |
| 溶解度 | DMF: Soluble,DMSO: Soluble,Methanol: Soluble,Water: Soluble | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.1808 mL | 5.9039 mL | 11.8078 mL |
| 5 mM | 236.2 μL | 1.1808 mL | 2.3616 mL |
| 10 mM | 118.1 μL | 590.4 μL | 1.1808 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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