PFB-FDGlu是一种具有细胞膜渗透性的荧光底物，可特异性用于活细胞中葡糖脑苷脂酶（GCase）活性的检测。
Cas No.:209540-62-5
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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PFB-FDGlu is a cell membrane-permeable fluorescent substrate specifically used for detecting glucocerebrosidase (GCase) activity in living cells. After being cleaved by lysosomal GCase, PFB-FDGlu releases a green fluorescent product, enabling quantitative analysis of individual cell enzyme activity through flow cytometry, fluorescence microscopy, or high-content imaging techniques[1].
References:
[1] Labrador-Garrido A, Zhong S, Hughes L, et al. Live cell in situ lysosomal GCase activity correlates to alpha-synuclein levels in human differentiated neurons with LRRK2 and GBA1 mutations. Front Cell Neurosci. 2023 Oct 16;17:1229213.
PFB-FDGlu是一种具有细胞膜渗透性的荧光底物，可特异性用于活细胞中葡糖脑苷脂酶（GCase）活性的检测。PFB-FDGlu能够在被溶酶体内的GCase切割后释放绿色荧光产物，从而通过流式细胞术、荧光显微镜或高内涵成像技术实现对单个细胞酶活性的定量分析[1]。
PFB-FDGlu法测定人单核细胞中葡糖脑苷脂酶活性
本实验方案根据研究内容整理，仅供参考，请根据实际需求进行调整。
（1）试剂准备：将PFB-FDGlu溶解于二甲基亚砜（DMSO）中，配制成37.5mmol/L的储备液（5mg PFB-FDGlu溶于154µl DMSO），分装后于-20°C保存，建议一周内使用；将CBE（Conduritol B-epoxide）溶解于DMSO中，配制成50mM的储备液（5mg CBE溶于616.9µl DMSO），分装后于-20°C保存；配制含5%胎牛血清（FBS）、1mM EDTA和25mM HEPES的FACS缓冲液，过滤除菌后于4°C保存；使用RPMI 1640培养基（含10% FBS、1%青霉素-链霉素和1% L-谷氨酰胺）作为细胞培养液。
（2）细胞分离与准备：采集人外周血至BD CPT抗凝管中，室温下以1800×g离心20分钟，收集外周血单核细胞（PBMC）层。用DPBS洗涤细胞一次（300×g，15分钟），重悬于预热的培养液中，进行细胞计数，调整细胞浓度至1×106个/管，分装至三个1.5ml离心管中（分别为CBE抑制组、DMSO对照组和同型对照管）。
（3）酶抑制与底物孵育：向CBE抑制管中加入2µl 50mM CBE储备液（终浓度1mM），向DMSO对照组中加入2µl DMSO，轻轻涡旋混匀，于37°C、5% CO₂培养箱中孵育60分钟。随后，向CBE抑制管和DMSO对照组中各加入2µl 37.5mM PFB-FDGlu储备液（终浓度0.75mM），轻轻涡旋混匀，继续于37°C、5% CO₂培养箱中孵育30分钟。
（4）反应终止与表面标记染色：孵育结束后，立即加入1ml预冷的FACS缓冲液终止反应，于4°C、300×g离心5分钟，弃上清。用95µl预冷FACS缓冲液重悬细胞，加入5µl抗人CD14-PE-Cy7抗体（CBE抑制管和DMSO对照组）或同型对照抗体（同型对照管），轻轻涡旋混匀，于4°C避光孵育20分钟。加入1ml FACS缓冲液洗涤细胞，离心后弃上清，用350µl FACS缓冲液重悬细胞，经细胞筛网过滤至流式细胞仪专用管中，于4°C避光保存，待测。
（5）流式细胞术检测与数据分析：使用配备488nm激光器和530nm-FITC滤光片（FL1通道）的流式细胞仪采集数据。
注意事项：
（1）该方法适用于新鲜分离或冻存复苏后的PBMC（冻存细胞需复苏后恢复培养约2小时）。
（2）重溶后的PFB-FDGlu性能会随储存时间延长而下降，建议在一周内使用。
（3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Hughes LP, Halliday GM, Dzamko N. Flow Cytometry Measurement of Glucocerebrosidase Activity in Human Monocytes. Bio Protoc. 2020 Apr 5;10(7):e3572.
| Cas No. | 209540-62-5 | SDF | Download SDF |
| 分子式 | C39H32F5NO16 | 分子量 | 865.66 |
| 溶解度 | DMSO : 100 mg/mL (115.52 mM; Need ultrasonic and warming) | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.1552 mL | 5.7759 mL | 11.5519 mL |
| 5 mM | 231 μL | 1.1552 mL | 2.3104 mL |
| 10 mM | 115.5 μL | 577.6 μL | 1.1552 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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- Purity: >99.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet