用过氧化物酶测定牛奶中残留过氧化氢的方法过氧化物酶[1]：
1.以1mg/mL的浓度溶于蒸馏水中。
2. 调整牛奶样品至室温。取10mL牛奶样品（或其稀释物），用0.1盐酸将pH调至4.5。如果样品被稀释，用0.01N HCI调整pH值。
3. 在样品中加入2mL 0.01M醋酸缓冲液（pH为4.5）。用蒸馏水将混合物稀释至20mL。
4. 用滤纸过滤样品，去除凝乳。或者，将样品在3400xg下离心10min以去除凝乳。
5. 每个样品滤液准备空白：取滤液5mL，加入蒸馏水1mL，0.1mL 1%邻二苯胺溶液。
6. 在另一管中加入滤液5mL、过氧化物酶溶液1mL、0.1mL 1%邻二苯胺的甲醇溶液。
7. 反应管室温（23-26℃）孵育10min。
8. 每管加入0.2mL 4N HCI终止反应，稳定颜色。
9. 再孵育5min后，在400nm波长处测量每个管的光密度。
10. 用已知浓度的过氧化氢标准溶液（1、2、3、4、5ug/mL）制备标准曲线，比较光密度和过氧化氢浓度。
使用过氧化物酶测定转化酶（SUC）活性的方案[2]:
1.根据试剂盒说明，在PBS中准备30mM蔗糖超纯溶液，100uM Amplex®Red试剂，0.2 2U/ml过氧化物酶和2U/ml葡萄糖氧化酶的工作溶液。此溶液应在使用前准备好，并避光。
2. 在37°C的PBS（pH 6.5）中，将细胞在AP（顶端）和BL（基底外侧）室中预孵育60min，以去除可能干扰反应的葡萄糖。预孵育后，用PBS洗涤细胞两次。
3. 预孵育结束时，在AP室中加入1mL反应缓冲液（30mM蔗糖在PBS中，pH 6.5）。在BL室中加入1mL PBS（pH 7.0）。控制可以运行使用30mM甘露醇代替蔗糖。
4. 在不同的时间间隔从AP室收集50ul，并转移到96孔板，黑色平底。由于酶活性在细胞分化过程中发生变化，因此可能有必要使用不同的时间点进行初步测定，以符合标准曲线的线性。
5. 加入50ul的工作溶液，与50ul的样品和标准品在96孔板中反应，室温下避光反应30min。在TECAN微孔板读卡器中读取荧光，调节为530nm激发，590nm发射，参照标准曲线进行空白相减后转化为浓度。
本协议仅提供了一个指南，应根据您的具体需要进行修改。
Reference:
[1] Gilliland S E, Enzymatic Determination of Residual Hydrogen Peroxide in Milk1, 2, Journal of Dairy Science[J]. 1969, 52: 321-324.
[2] Ferruzza S, Rossi C, Scarino M L, et al., A protocol for in situ enzyme assays to assess the differentiation of human intestinal Caco-2 cells, Toxicology in Vitro[J]. 2012, 26: 1247-1251.
