Green DND-26

本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。

1、制备Green DND-26染色液

（1）取出冻存的染色液，恢复至室温后，通过瞬时离心将染液集中在管底。

（2）工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基或PBS)稀释储存液，配制浓度为50-75 nM的工作液。

注意:

①    请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配；

②    为了减少背景过高或过载产生的假阳性现象，染料的浓度应尽可能低。

2、细胞悬浮染色

（1）悬浮细胞：悬浮细胞经4°C、1000g离心3-5分钟，弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。

（2）贴壁细胞：使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。

（3）使用0.5-1mL工作液重悬约10⁶个细胞，37℃避光孵育30分钟至2小时。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。

（4）孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。

（5）使用预温的细胞培养基重悬孵育细胞。

3、细胞贴壁染色

（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。

（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。

（3）从盖玻片的一角加入100uL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

（4）37℃避光孵育30分钟至2小时。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。

（5）孵育结束后吸弃染料工作液，加入PBS清洗2-3次，使用预温的培养基孵育细胞。

4、荧光检测：Green DND-26的最大吸收波光/发射光为504/511nm。

注意事项：

1、荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。