Red Blood Cell Lysis Buffer

使用说明：

对于组织细胞样品：
1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2、加入 3-5 倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解 1-2 分钟。例如细胞沉淀的体积为 1ml，则加入 3-5ml 的红细胞裂解液。本步骤在室温或 4 度操作均可。
3、400-500g 离心 5 分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤 2 和步骤 3 一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5、洗涤 1-2 次：加入适量 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g 离心 2-3 分钟，弃上清。可再重复 1 次，共洗涤 1-2 次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的 5 倍。4℃离心效果更佳。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤：
1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2、对于 0.2ml 细胞沉淀加入 1ml 红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解 1-2 分钟。本步骤在室温或 4 度操作均可。
3、加入 15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
4、400-500g 离心 5 分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
5、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤 2 和步骤 3 一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
注：对于常规步骤，多一步洗涤过程中的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。

对于血液样品：
1、取新鲜抗凝血，400-500g 离心 5 分钟，离心弃上清。
2、加入 6-10 倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解 1-2 分钟。例如细胞沉淀的体积为 1ml，则加入 6-10ml 的红细胞裂解液。本步骤在室温或 4 度操作均可。
注意：对于鼠的血液，裂解 1-2 分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至 4-5 分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
3、 400-500g 离心 5 分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤 2 和步骤 3 一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5、洗涤 1-2 次：加入适量 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g 离心 2-3 分钟，弃上清。可再重复 1 次，共洗涤 1-2 次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的 5 倍。4℃离心效果更佳。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
注：对于微量或少量的血液样品，可在第一步中不进行离心弃上清的操作，直接在第二步中加入 10 倍血液体积的红细胞裂解液，并在室温或 4℃裂解 4-5 分钟。对于鼠的血液，裂解 4-5 分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至10 分钟，但通常不宜超过 15 分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。后续步骤相同。

对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤：
1、每 1ml 新鲜抗凝血中加入 10ml 红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解 4-5 分钟。本步骤在室温或 4 度操作均可。
注：对于鼠的血液，裂解 4-5 分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至 10 分钟，但通常不宜超过 15 分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
2、加入 20-30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
3、 400-500g 离心 5 分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤 2 和步骤 3 一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
注：对于常规步骤，多一步洗涤过程的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。

注意事项：
1、如果经过红细胞裂解液处理后的样品后续用于总 RNA 的提取，在处理细胞时不必使用经过 DEPC处理过的溶液。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。