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STY-BODIPY是一种高度吸收的可自动氧化的共底物,通过检测STY-BODIPY的消耗能够监测反应进程。
应用案例:STY-BODIPY作为受抑制的自氧化的信号载体,能够确定抑制剂与链携带过氧自由基反应的抑制速率常数(kinh)和化学计量 (n)。
文献来源:
Ron Shah,Mikhail S Shchepinov,Derek A Pratt. Resolving the Role of Lipoxygenases in the Initiation and Execution of Ferroptosis. ACS Cent Sci. 2018 Mar 28;4(3):387-396. doi: 10.1021/acscentsci.7b00589. Epub 2018 Feb 7.
实验方法:
1.向含有2.34 mL PBS(pH7.4,10 mM)的比色皿中添加脂质体(125 µL 20mM PBS溶液,pH 7.4),并将溶液在37℃下平衡5分钟(描述了从 Egg-PC 形成脂质体);
2.将比色皿清空,加入10 µL 2 mM STY-BODIPY 的DMSO溶液,然后加入 10 µL 0.05M MeOAMVN 的乙腈溶液,并将溶液充分混合;
3.5分钟后,加入等份的 LOX 抑制剂或 RTA 储备溶液 (1 mM in DMSO),随后检测565 nm处吸光度损失,根据方程式确定每个实验的抑制速率常数(kinh)和化学计量(n)。分别为(1)和(2)。动力学数据以三个独立测量的平均值给出。在选择的对照实验中获得了无法区分的结果,其中在脂质体去除之前添加抗氧化剂。
实验结果示例:

STY-BODIPY (A) serves as the signal carrier in inhibited autoxidations, enabling determination of inhibition rate constants (kinh) and stoichiometries (n) for reactions of inhibitors with chain-carrying peroxyl radicals (eqs 1 and 2, respectively). Coautoxidations of cumene (3.6 M) and STY-BODIPY (10 μM) initiated by AIBN (6 mM) in chlorobenzene at 37 °C (black) and inhibited by 2 μM of NDGA, zileuton, PD146176, CAY10649, CJ-13610, Lip-1, Fer-1, C15-THN, α-TOH, and PMC (B). Coautoxidations of egg phosphatidylcholine liposomes (1.0 mM) and STY-BODIPY (10 μM) suspended in phosphate-buffered saline (10 mM) at pH 7.4 initiated by MeOAMVN (0.2 mM) at 37 °C (black) and inhibited by 2 μM of NDGA, zileuton, PD146176, CAY10649, CJ-13610, Lip-1, Fer-1, C15-THN, α-TOH, and PMC (C). Inhibition rate constants obtained from coautoxidations of cumene (D) or phosphatidylcholine liposomes (E) with STY-BODIPY at 37 °C.
STY-BODIPY (A) 作为受抑制的自氧化的信号载体,能够确定抑制剂与链携带过氧自由基反应的抑制速率常数 (kinh) 和化学计量 (n)(分别为方程式 1 和2)。 异丙苯 (3.6 M) 和 STY-BODIPY (10 μM) 的共氧化反应由 AIBN (6 mM) 在氯苯中于 37 °C(黑色)引发,并被 2 μM NDGA、zileuton、PD146176、CAY10649、CJ-13610、Lip 抑制 -1、Fer-1、C15-THN、α-TOH 和 PMC (B)。 悬浮在 pH 7.4 的磷酸盐缓冲盐水 (10 mM) 中的卵磷脂酰胆碱脂质体 (1.0 mM) 和 STY-BODIPY (10 μM) 的共氧化作用由 MeOAMVN (0.2 mM) 在 37 °C 下引发(黑色),并被 2 μM 抑制 NDGA、齐留通、PD146176、CAY10649、CJ-13610、Lip-1、Fer-1、C15-THN、α-TOH 和 PMC (C)。 从枯烯 (D) 或磷脂酰胆碱脂质体 (E) 与 STY-BODIPY 在 37 °C 下的共氧化获得的抑制速率常数。
注意事项:
1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。