本方案仅提供一个指导,请根据您的具体需要进行修改。
1、制备Hoechst染色液
(1) 配制Hoechst染料储存液: 使用DMSO溶解固体粉末,配置成10mg/mL的Hoechst染料储存液。
注意: Hoechst储存液建议分装后于-4℃或-20℃避光保存,避免反复冻融。
(2)工作液制备:使用预热的无血清培养基或缓冲液(如HBSS或PBS)稀释储存液,配制浓度为10μg/mL的Hoechst工作液。
注意: 请根据实际情况调整 Hoechst 工作液浓度,现用现配。
2、细胞染色
2.1 悬浮细胞(以6孔板为例)
(1)悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液,使用PBS清洗两次,每次5分钟。
(2)加入1mL的Hoechst染料工作液,室温避光孵育5-10 min分钟。
(3)孵育结束后,经1000g离心5分钟,去除上清液,加入PBS清洗2-3次,每次5分钟。
(4)使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞,通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察。
2.2 贴壁细胞
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片,吸出过量的培养基,将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL的Hoechst染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞,室温避光孵育5-15min分钟。
(4)吸弃染料工作液,使用培养液洗盖玻片2~3次,通过荧光显微镜进行观察。
3、荧光显微镜检测:HOE-S 785026的最大激发光/发射光波长是356/451nm。
注意事项:
1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。