Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA)是一种荧光猝灭底物（FRET底物），用于检测细菌分类酶活性。
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA) is a fluorescent quenching substrate (FRET substrate) used to detect bacterial Sortase activity. Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA) consists of a Sortase recognition sequence (LPXTG), an N-terminal fluorescent group Abz, and a C-terminal quencher group DNP, and is commonly used for Sortase A (SrtA) enzyme activity assays and inhibitor screening experiments. After cleavage by Sortase A, Abz is separated from DNP, resulting in the recovery of fluorescence. Cleavage of this substrate can be monitored at Ex/Em=320nm/420nm[1].
References:
[1] Zhang J, et al. Antiinfective therapy with a small molecule inhibitor of Staphylococcus aureus sortase. Proc Natl Acad Sci U S A. 2014 Sep 16;111(37):13517-22.
Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA)是一种荧光猝灭底物（FRET底物），用于检测细菌分类酶活性。Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA)由一段Sortase识别序列（LPXTG）、N端荧光基团Abz和C端淬灭基团DNP组成，常用于Sortase A（SrtA）酶活性检测和抑制剂筛选实验。经过Sortase A的裂解，Abz与DNP分离，荧光恢复，在Ex/Em=320nm/420nm处可以监测到底物的裂解[1]。
Sortase A活性检测[1-2]
本方案来自文献，请根据您的具体需求修改。
1.制备底物工作液
（1）配置储存液：使用DMSO溶解Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA)配置10mM储存液。
注意:未使用的储存液分装后在-20°C或-80°C避光保存，避免反复冻融。
（2）配置工作液:使用反应缓冲液（50mM Tris-HCl, 150mM NaCl；pH=7.5）稀释储存液。
注意：工作液现配现用，4℃或冰上短暂保存。
3.准备一个96孔板，包括：
实验孔: Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA)底物与Sortase A混合液，浓度分别为10μM和5-15μM。
样品空白孔：仅Bacterial Sortase Substrate III, Abz/DNP (TFA)底物，浓度为10μM，加反应缓冲液补齐体积。
底物空白孔：仅Sortase A，浓度为5-15μM，加反应缓冲液补齐体积。
4. 96孔板37℃孵育10-60min，酶标仪检测320nm激发下420nm处的荧光强度。
注意事项：
1）荧光底物存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Gaspar AH, Marraffini LA, Glass EM, Debord KL, Ton-That H, Schneewind O. Bacillus anthracis sortase A (SrtA) anchors LPXTG motif-containing surface proteins to the cell wall envelope. J Bacteriol. 2005;187(13):4646-4655.
[2] Chen Y, Li W, Wang L, Wang B, Suo J. Novel inhibition of Staphylococcus aureus sortase A by plantamajoside: implications for controlling multidrug-resistant infections. Appl Environ Microbiol. 2025;91(1):e0180424.
| Cas No. | SDF | ||
| 分子式 | C43H58N11F3O16 | 分子量 | 1042.02 |
| 溶解度 | DMSO : 50 mg/mL (Need ultrasonic); H2O : < 0.1 mg/mL (insoluble) | 储存条件 | Store at -80°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 959.7 μL | 4.7984 mL | 9.5967 mL |
| 5 mM | 191.9 μL | 959.7 μL | 1.9193 mL |
| 10 mM | 96 μL | 479.8 μL | 959.7 μL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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- Purity: >99.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
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