Mca-Ala-Pro-Lys(Dnp)-OH是一种特异的ACE2（血管紧张素转换酶2）猝灭荧光底物，可用于检测尿液、心脏及肺组织中的ACE2活性。
Cas No.:305336-82-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Mca-Ala-Pro-Lys(Dnp)-OH is a specific quenched fluorogenic substrate for angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2). Mca-Ala-Pro-Lys(Dnp)-OH can be used to detect ACE2 activity in biological samples such as urine, heart, and lung tissues. Mca-Ala-Pro-Lys(Dnp)-OH serves as a critical tool in research related to the renin-angiotensin system (RAS), cardiovascular diseases, and pulmonary conditions[1].
References:
[1] Xiao F, Burns KD. Measurement of Angiotensin Converting Enzyme 2 Activity in Biological Fluid (ACE2). Methods Mol Biol. 2017;1527:101-115.
Mca-Ala-Pro-Lys(Dnp)-OH是一种特异的ACE2（血管紧张素转换酶2）猝灭荧光底物，可用于检测尿液、心脏及肺组织中的ACE2活性。Mca-Ala-Pro-Lys(Dnp)-OH是研究肾素-血管紧张素系统（RAS）、心血管疾病及肺部疾病等相关领域的重要工具[1]。
Mca-Ala-Pro-Lys(Dnp)-OH测定生物体液中ACE2活性
本实验方案根据研究内容整理，仅供参考，请根据实际需求进行调整。
1.试剂准备
（1）ACE2底物溶液：将Mca-Ala-Pro-Lys(Dnp)-OH（15mM储备液，用1% NH₄OH配制）与蛋白酶抑制剂NEM（100mM）和PMSF（100mM）按比例加入预冷的MES缓冲液（50mM MES, 300mM NaCl, 10μM ZnCl₂, pH=6.8）中，使终浓度分别为15μM、1mM和1mM。
（2）ACE2标准品：重组人ACE2或小鼠ACE2用PBS稀释至10μg/mL，使用时进一步梯度稀释至1.56–50ng/mL的标准曲线范围。
（3）ACE2抑制剂：MLN-4760（10μM）或DX600（10μM），用于特异性活性验证。
2. 生物样本预处理
（1）尿液：采集后立即冰浴，离心（12000×g, 5min, 4°C），取上清，-80°C保存。检测前稀释至少1:2。
（2）血浆：肝素抗凝血离心（3,000×g, 10min, 4°C）分离血浆，-80°C保存。检测前稀释1:7.5。
（3）细胞培养上清：无血清培养的细胞上清直接离心取上清，无需稀释。
3.ACE2活性检测步骤
（1）在黑色96孔板中每孔加入10μL抑制剂（MLN-4760或DX600）或ddH₂O（对照）。
（2）加入75μL ACE2底物/缓冲液混合液，再加入15μL稀释后的生物样本或ACE2标准品，总反应体积100μL。
（3）用密封膜和铝箔避光，室温震荡孵育16小时。
（4）使用荧光酶标仪检测（激发波长320nm，发射波长405nm），读取相对荧光单位（RFU）。
注意事项：
（1）高背景荧光样本（如浓尿液）需进一步稀释，葡萄糖、尿素、肌酐和白蛋白不干扰检测结果。
（2）避免使用含EDTA的采血管或血清（含ACE2活性），pH需稳定在6.8±0.2。
（2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Xiao F, Burns KD. Measurement of Angiotensin Converting Enzyme 2 Activity in Biological Fluid (ACE2). Methods Mol Biol. 2017;1527:101-115.
| Cas No. | 305336-82-7 | SDF | |
| 分子式 | C32H36N6O12 | 分子量 | 696.67 |
| 溶解度 | Soluble in water at 25°C, 1,00 g/L | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.4354 mL | 7.177 mL | 14.354 mL |
| 5 mM | 287.1 μL | 1.4354 mL | 2.8708 mL |
| 10 mM | 143.5 μL | 717.7 μL | 1.4354 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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