Hippuryl-Arg-OH是一种用于识别和切割含有精氨酸的肽键的酶活性测定的荧光信号底物。
Cas No.:744-46-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Hippuryl-Arg-OH is a fluorescent signal substrate used in enzyme activity assays for the identification and cleavage of peptide bonds containing arginine. Hippuryl-Arg-OH can be used for enzyme activity studies such as carboxypeptidase B and aminopeptidase, as well as related research in the field of drug development[1-4].
References:
[1] Liu YH, Konermann L. Enzyme conformational dynamics during catalysis and in the 'resting state' monitored by hydrogen/deuterium exchange mass spectrometry. FEBS Lett. 2006 Oct 2;580(22):5137-42.
[2] Fricker LD, Devi L. Comparison of a spectrophotometric, a fluorometric, and a novel radiometric assay for carboxypeptidase E (EC 3.4.17.10) and other carboxypeptidase B-like enzymes. Anal Biochem. 1990 Jan;184(1):21-7.
[3] Song L, Fricker LD. Purification and characterization of carboxypeptidase D, a novel carboxypeptidase E-like enzyme, from bovine pituitary. J Biol Chem. 1995 Oct 20;270(42):25007-13.
[4] Casarini DE, Alves KB, Araújo MS, et al. Endopeptidase and carboxypeptidase activities in human urine which hydrolyze bradykinin. Braz J Med Biol Res. 1992;25(3):219-29.
Hippuryl-Arg-OH是一种用于识别和切割含有精氨酸的肽键的酶活性测定的荧光信号底物。Hippuryl-Arg-OH可用于羧肽酶B、氨肽酶等酶活性研究以及药物研发领域的相关研究[1-4]。
Hippuryl-Arg-OH法测定血浆中TAFIa活性[1]
本实验方案根据研究内容整理，仅供参考，请根据实际需求进行调整。
1.试剂准备：试剂准备：将Hippuryl-Arg底物配制成20mM的工作液；将凝血酶（Thrombin）配制成5U/mL、血栓调节蛋白（Thrombomodulin）配制成7.5U/mL的工作液，两者混合形成凝血酶-血栓调节蛋白复合物；配制60mM的CaCl₂溶液；配制活化缓冲液（20mM HEPES，0.15M NaCl，5mM CaCl₂，pH=7.4）；配制1M HCl溶液用于终止反应；配制1M NaOH溶液；配制1M磷酸盐缓冲液；配制溶于1,4-二氧六环的3%氰尿酰氯溶液。
2.TAFI活化：取15μL血浆样本，与12μL凝血酶-血栓调节蛋白复合物、8.5μL 60mM CaCl₂溶液以及24μL活化缓冲液混合。将混合液在室温下孵育10分钟，以将血浆中的TAFI活化为TAFIa。随后，加入20μL水蛭素（Hirudin）以终止活化反应。
3.TAFIa活性检测：向上一步得到的反应液中加入20μL 20mM的Hippuryl-Arg底物工作液，在室温下孵育10分钟。随后，加入20μL 1M HCl溶液以终止底物反应。然后，依次向反应体系中加入20μL 1M NaOH溶液和25μL 1M磷酸盐缓冲液。最后，加入60μL溶于1,4-二氧六环的3%氰尿酰氯溶液，并静置使其充分显色。
4.检测与计算：将完成显色的反应液在14,000g下离心2分钟。取上清液，使用光谱仪在405nm波长下测定其吸光度值。所有样品及标准曲线点均需用热灭活血清稀释至50%后，进行复孔测定。
注意事项：
（1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Santamaría A, Borrell M, Oliver A, et al. Association of functional thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor (TAFI) with conventional cardiovascular risk factors and its correlation with other hemostatic factors in a Spanish population. Am J Hematol. 2004 Aug;76(4):348-52.
| Cas No. | 744-46-7 | SDF | |
| 分子式 | C15H21N5O4 | 分子量 | 335.36 |
| 溶解度 | 50 mg/ml in AcOH 80 % | 储存条件 | Store at -20°C; protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.9819 mL | 14.9094 mL | 29.8187 mL |
| 5 mM | 596.4 μL | 2.9819 mL | 5.9637 mL |
| 10 mM | 298.2 μL | 1.4909 mL | 2.9819 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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