Fura-2 AM是钙离子指示剂Fura-2的一种酯化且具有细胞渗透性的形式，可用于测量钙离子信号。
Cas No.:108964-32-5
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Fura-2 AM, an esterified cell-permeant form of the Ca2+ indicator fura-2, is useful for measuring calcium signals [1]. Fura-2 AM will be de-esterified by intracellular esterases, thereby being trapped within the cell and enabling Fura-2 to bind to calcium ions[2]. Fura-2 AM has been widely used to measure the content of cytoplasmic free Ca2+ in monolayers and suspensions of various types of animal cells[3]. Fura-2 AM can be utilized to develop new detection tools for measuring the concentration of free calcium ions within bacteria (such as Selenomonas ruminantium)[4]. Fura-2 AM can be used in calcium imaging systems to analyze the increase in calcium ion concentration in cortical neurons[5].
References:
[1] Oakes S G, Martin II W J, Lisek C A, et al. Incomplete hydrolysis of the calcium indicator precursor fura-2 pentaacetoxymethyl ester (fura-2 AM) by cells[J]. Analytical biochemistry, 1988, 169(1): 159-166.
[2] Gulaboski R, Pereira C M, Cordeiro M N D S, et al. Redox properties of the calcium chelator Fura-2 in mimetic biomembranes[J]. Cell calcium, 2008, 43(6): 615-621.
[3] Malgaroli A, Milani D, Meldolesi J, et al. Fura-2 measurement of cytosolic free Ca2+ in monolayers and suspensions of various types of animal cells[J]. The Journal of cell biology, 1987, 105(5): 2145-2155.
[4] Nakamura I, Nakai Y, Izumi H. Use of fura-2/AM to measure intracellular free calcium in Selenomonas ruminantium[J]. The Tohoku Journal of Experimental Medicine, 1996, 179(4): 291-294.
[5] Barreto-Chang O L, Dolmetsch R E. Calcium imaging of cortical neurons using Fura-2 AM[J]. Journal of visualized experiments: JoVE, 2009 (23): 1067.
Fura-2 AM是钙离子指示剂Fura-2的一种酯化且具有细胞渗透性的形式，可用于测量钙离子信号[1]。Fura-2 AM会被细胞内的酯酶去酯化，从而滞留在细胞内并使Fura-2能够结合钙离子[2]。Fura-2 AM已广泛用于测量多种动物细胞单层及悬浮液中细胞质游离钙离子的含量[3]。Fura-2 AM可用于开发新型检测工具，以测量细菌（例如Selenomonas ruminantium）内部游离钙离子的浓度[4]。Fura-2 AM可用于钙成像系统，以分析皮质神经元中钙离子浓度的增加[5]。
使用Fura-2 AM测定钙含量
本方案仅提供了一种指导原则，具体操作需根据您的实际需求进行调整。
1. 准备染色溶液
（1）制备标准溶液：用高质量无水DMSO配制浓度为1-10mM的Fura-2 AM储备溶液。注意：将未使用的储备溶液分装并存放在避光条件下于-20°C或-80°C下保存，以避免反复冻融。
（2）制备工作溶液：用合适的缓冲液（如不含血清和酚红的培养基或PBS）将储备溶液稀释，配制浓度为1-10μM的工作溶液。
注意:
1) Fura-2 AM工作液制备时，有时需要往储存液中加入适量的20%的Pluronic F-127溶液，以增强Fura-2 AM的水溶性；
2) Pluronic F-127可以防止Fura-2 AM在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但PluronicF-127可降低Fura-2 AM的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存；
3) 配制20%(w/v) Pluronic F-127母液:称取100mg Pluronic F-127粉末，加入500μl DMSO，40-50℃加热20-30min，室温保存。如有结晶析出可重新加热溶解，不影响使用；
4) （可选）GLPBIO提供溶解好的Pluronic F-127(20% Solution in DMSO) ，货号：GB30091；
5) 添加等体积20% Pluronic F-127溶液到储存液中，从而使Pluronic F-127的最终工作浓度约为0.02%；
6) 请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配，避免反复冻融。
2. 细胞悬液染色
（1）悬浮细胞：在4°C下以1000g的转速离心3-5分钟，弃去上清液，然后用PBS或其他缓冲液洗涤两次，每次5分钟；
（2）贴壁细胞：用PBS或其他缓冲液洗涤两次，加入胰蛋白酶消化细胞，消化完成后以1000g的转速离心3-5分钟；
（3）加入Fura-2 AM工作液使细胞复原，然后在黑暗中于37°C或室温下孵育20分钟至2小时。不同细胞的最适孵育时间有所不同，请根据您的具体实验需求进行探索。
注意：
1) 大多数细胞中推荐的Fura-2 AM工作浓度为1-5μM，具体浓度需根据实验需求进行优化。为避免因过量使用而导致细胞毒性，应根据获得有效结果的最低探针浓度来使用探针；
2) （可选）如果细胞中含有有机阴离子转运体，您可能需要在细胞培养基中添加probenecid（1-2.5mM）或sulfinpyrazone（0.1-0.25mM），以降低脱酯探针的泄漏水平。probenecid或sulfinpyrazone的储备液呈碱性，因此添加培养基后需要重新调整pH值；
3) 如果使用含血清的培养基，血清乳糖酶会降解Fura-2 AM，从而降低染料加载效果；而含有酚红的培养基会使背景值稍高。建议在添加染色工作液前先清洗细胞2至3次；
4) 降低探针加载温度可能会减少探针的分隔现象。
（4）孵育结束后，以1000g的转速离心5分钟以去除染液，加入PBS并清洗2-3次以去除残留的探针；
（5）在室温下继续孵育30分钟，以确保细胞内Fura-2 AM完全脱酯化。
3. 细胞黏附染色
（1）将贴壁细胞培养在无菌载玻片上；
（2）将载玻片从培养基中取出，吸去多余的培养基，并将载玻片置于潮湿环境中；
（3）从载玻片的一个角落加入100μl的Fura-2 AM工作液，并轻轻摇动均匀覆盖所有细胞；
（4）在黑暗中于37°C或室温下孵育20分钟至2小时。不同细胞的最适孵育时间不同，请根据您的具体实验需求进行探索；
（5）孵育结束后，弃去染液工作液，并用PBS洗载玻片2至3次；
（6）在室温下孵育30分钟。
4. 注意事项：
（1）所有荧光染料都存在猝灭问题。请尽可能避免光照，以减缓荧光猝灭现象。
（2）为了您的安全和健康，请在操作时穿戴实验服和一次性手套。
（3）Fura-2 AM在整个实验过程中都应存放在黑暗环境中。
（4）本实验方案及所有试剂仅供科学研究使用。
References:
[1] Barreto-Chang O L, Dolmetsch R E. Calcium imaging of cortical neurons using Fura-2 AM[J]. Journal of visualized experiments: JoVE, 2009 (23): 1067.
| Cas No. | 108964-32-5 | SDF | |
| 别名 | 荧光钙探针Fura2-AM,Fura-2 Acetoxymethyl ester | ||
| 化学名 | bis(acetoxymethyl) 2,2'-((2-(5-((acetoxymethoxy)carbonyl)oxazol-2-yl)-4-(2-(2-(bis(2-(acetoxymethoxy)-2-oxoethyl)amino)-5-methylphenoxy)ethoxy)benzofuran-5-yl)azanediyl)diacetate | ||
| Canonical SMILES | O=C(CN(CC(OCOC(C)=O)=O)C1=CC=C2OC(C3=NC=C(C(OCOC(C)=O)=O)O3)=CC2=C1OCCOC4=CC(C)=CC=C4N(CC(OCOC(C)=O)=O)CC(OCOC(C)=O)=O)OCOC(C)=O | ||
| 分子式 | C44H47N3O24 | 分子量 | 1001.85 |
| 溶解度 | DMSO: 10 mg/ml | 储存条件 | Store at -20°C,protect from light,unstable in solution, ready to use. |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 998.2 μL | 4.9908 mL | 9.9815 mL |
| 5 mM | 199.6 μL | 998.2 μL | 1.9963 mL |
| 10 mM | 99.8 μL | 499.1 μL | 998.2 μL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >94.00% Appearance: A solid
- COA (Certificate of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet