DSP

目录号: GC18378纯度: >97.00%同义词: 3,3'-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯),3,3′-Dithiodipropionic acid di
DSP是一种与赖氨酸等氨基反应的同源双功能交联剂,广泛用于表面功能化,是将酶和抗体固定在金表面的首选连接分子。

DSP
Cas No.: 57757-57-0
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文献被引

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  • Nature cover
    Nature
    641, 529–536 (2025)
  • Nature cover
    Nature
    628, 630–638 (2024)
  • Nature cover
    Nature
    632, 686–694 (2024)
  • Nature cover
    Nature
    618, 1017–1023 (2023)
  • Nature cover
    Nature
    610, 366–372 (2022)
  • Cell cover
    Cell
    187(9):2288-2304 (2024)
  • Cell cover
    Cell
    183(7):1867-1883 (2020)
  • Science cover
    Science
    388(6745) (2025)
  • Science cover
    Science
    387(6739) (2025)
  • Science cover
    Science
    387(6734) (2025)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    35, 97–116 (2025)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    34, 683–706 (2024)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    33, 273–287 (2023)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    33, 546–561 (2023)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    33, 904–922 (2023)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    31, 1291–1307 (2021)

产品描述 Description

DSP, a homobifunctional cross-linker that reacts with amino groups such as lysine, and is widely used for surface functionalization, is the preferred linker for immobilizing enzymes and antibodies on gold surfaces[1-3]. DSP has a disulfide bridge within its structure, which cleaves upon binding to gold[2]. By immobilizing DSP on a gold thin film (GTF), dopamine (DA) can be selectively captured via the specific reaction between its primary amine and the NHS ester of DSP, enabling sensitive detection of DA in human cerebrospinal fluid (CSF) samples[4-5]. DSP can be employed in irreversible biotinylation procedures (IBP) to eliminate interference from intermolecular disulfide bonds during S-nitrosation detection[6]. DSP can also be used to isolate weak protein complexes and to prepare Au-TiO2 thin films for immunoassay experiments[3, 7].

References:
[1] Darder M, Takada K, Pariente F, et al. Dithiobissuccinimidyl propionate as an anchor for assembling peroxidases at electrodes surfaces and its application in a H2O2 biosensor. Anal Chem. 1999;71(24):5530-5537
[2] Ataman Sadık D, Boyacı İH, et al. Mixed monolayer decorated SPR sensing surface for thrombin detection. J Pharm Biomed Anal. 2019;176:112822.
[3] Akaki K, Mino T, Takeuchi O. DSP-crosslinking and Immunoprecipitation to Isolate Weak Protein Complex. Bio Protoc. 2022;12(15):e4478.
[4] Zhang K, Liu Y, Wang Y, et al. Quantitative SERS Detection of Dopamine in Cerebrospinal Fluid by Dual-Recognition-Induced Hot Spot Generation. ACS Appl Mater Interfaces. 2018;10(18):15388-15394.
[5] Gu H, Guo Y, Xiao X, et al. Double molecular recognition strategy based on boronic acid-diol and NHS ester-amine for selective electrochemical detection of cerebral dopamine. Anal Bioanal Chem. 2020;412(15):3727-3736.
[6] Huang B, Chen C. Detection of protein S-nitrosation using irreversible biotinylation procedures (IBP). Free Radic Biol Med. 2010;49(3):447-456.
[7] Meira DI, Barbosac AI, Proença M, et al. Immobilizing antibody biorecognition layers on Au–TiO2 thin films: direct (physisorption) vs. DSP-crosslinking (chemisorption) surface functionalization. Journal of Physics D: Applied Physics. 2024;415401.

DSP是一种与赖氨酸等氨基反应的同源双功能交联剂,广泛用于表面功能化,是将酶和抗体固定在金表面的首选连接分子[1-3]。DSP内含二硫键,可与金结合时断裂[2]。将DSP固定于金薄膜(GTF)后,可通过NHS酯与多巴胺(DA)伯胺的特异性反应选择性捕获DA,从而在人脑脊液(CSF)样本中实现高灵敏检测[4-5]。DSP可用于不可逆生物素化程序(IBP)处理中,排除分子间二硫键对S-亚硝基化检测的干扰[6]。DSP还可用于分离弱蛋白复合物及制备用于免疫分析实验的Au-TiO2薄膜[7-8]

实验参考方法 Experimental Reference Method

该计划仅提供一个指导方案,请根据具体需求进行修改。

(1)DSP交联与免疫沉淀分离弱相互作用蛋白复合物[1]

A. 制备表达目标蛋白(POI)的细胞

1. 每样品取8.0×105个HeLa细胞铺于10cm皿中(每皿10mL含10% FBS的DMEM)。

2. 37°C、5% CO2培养24h。

3. 转染FLAG-HA双标签POI表达质粒。

4. 37°C、5% CO2过夜培养。

B. 配制洗涤缓冲液(Wash buffer)和免疫沉淀缓冲液(IP buffer)

1. DSP交联与免疫沉淀当天,先配制Wash buffer与IP buffer,置于冰上待用。

C. DSP交联

1. 临用前新鲜配制100mM DSP。

2. 取100mM DSP用预热至37°C的PBS稀释成0.1mM。

3. 每皿用5mL预热37°C PBS洗涤两次。

4. 弃尽PBS。

5. 每皿加入5mL 0.1mM DSP(步骤C2配制)。

6. 37°C、5% CO2培养箱孵育30min。

D. 制备第一次IP磁珠

1. 在步骤C6孵育期间,按每样品40μL Dynabeads Protein G的量集中分装于1.5mL管中。

2. 用等体积Wash buffer洗磁珠三次:将管置于磁力架,待磁珠吸附后吸弃上清;加入冰Wash buffer;离架,吹打重悬;重复两次。

3. 最后一次弃尽上清。

4. 用冰IP buffer重悬磁珠。

5. 每样品加入1μL抗FLAG抗体。

6. 4°C旋转孵育1h。

E. 终止DSP交联

1. 步骤C6 30min后,弃0.1mM DSP,每皿用5mL预热37°C PBS冲洗一次。

2. 弃PBS,每皿加5mL室温STOP溶液。

3. 室温孵育15min。

F. 第一次免疫沉淀(IP)

1. 弃STOP溶液。

2. 每皿用5mL冰PBS洗两次。

3. 弃PBS。

4. 每皿加500μL冰IP buffer。

5. 用细胞刮刮下细胞,连同缓冲液一并转入1.5mL管(每样1管)。

6. 吹打重悬。

7. 冰上裂解10min。

8. 4°C、20,000×g离心5min。

9. 取500μL上清至新管用于IP。

10. 加入40μL步骤D6制得的抗FLAG抗体磁珠。

11. 4°C旋转孵育2h。

G. 制备第二次IP磁珠

1. 步骤F11孵育结束前约30min,按步骤D1-D4洗涤新的Dynabeads Protein G。

2. 每样品加入1μL抗HA抗体。

3. 4°C旋转孵育1h。

H. 用FLAG肽洗脱

1. 用TBS稀释FLAG肽储备液,配制FLAG洗脱缓冲液,置冰上。

2. 步骤F11孵育后,用700μL冰Wash buffer洗磁珠三次。

3. 弃尽Wash buffer。

4. 温和吹打,用100μL FLAG洗脱缓冲液重悬磁珠。

5. 4°C旋转孵育10min。

6. 磁力架分离,将含POI及其结合蛋白的上清转至新1.5mL管。

7. 重复步骤H4-H5一次。

8. 合并两次洗脱液。

9. 加入300μL冰IP buffer(终体积500μL/样)。

I. 第二次免疫沉淀

1. 将500μL步骤H9洗脱液与40μL步骤G3制得的抗HA抗体磁珠混合。

2. 4°C旋转孵育2h。

J. 最终洗脱

1. 步骤I2孵育后,用700μL冰Wash buffer洗磁珠三次。

(2)小鼠脑组织裂解液的DSP处理[2]

1. 将小鼠脑组织裂解液用5mM DSP处理30min,以在体外形成分子间二硫键(Pr-S-S-Pr),随后加入Tris缓冲液终止反应。

2. 处理后的裂解液分别采用原始生物素交换法和不可逆生物素化程序(IBP)进行分析。

(3)用DSP制备用于免疫分析实验的Au-TiO2薄膜[3]

1. 将经等离子体活化的Au-TiO2薄膜用溶于无水二甲基亚砜(DMSO,≥99.9%)的DSP溶液进行功能化,DSP浓度分别为0.4、1、4和10mg/mL。

2. 固定时间为30min,随后依次用DMSO、PBS(磷酸盐缓冲液;pH7.4;10mM)和96%乙醇进行清洗,以去除未结合的交联剂分子。

References:

[1] Akaki K, Mino T, Takeuchi O. DSP-crosslinking and Immunoprecipitation to Isolate Weak Protein Complex. Bio Protoc. 2022;12(15):e4478.

[2] Huang B, Chen C. Detection of protein S-nitrosation using irreversible biotinylation procedures (IBP). Free Radic Biol Med. 2010;49(3):447-456.

[3] Meira DI, Barbosac AI, Proença M, et al. Immobilizing antibody biorecognition layers on Au–TiO2 thin films: direct (physisorption) vs. DSP-crosslinking (chemisorption) surface functionalization. Journal of Physics D: Applied Physics. 2024;415401.

产品文档 Product Documents

Purity:>97.00%

化学性质Chemical Properties

CAS 号
57757-57-0
同义词
3,3'-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯),3,3′-Dithiodipropionic acid di
分子式
C14H16N2O8S2
分子量
404.41 g/mol
溶解性
DMF: 30 mg/ml,DMSO: 30 mg/ml,DMSO:PBS (pH 7.2) (1:4): 0.20 mg/ml
保存条件
Store at -20°C, protect from light, stored under nitrogen
General tips
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。
为了提高溶解度,请将管子加热至 37°C,然后在超声波浴中震荡一段时间。
Shipping Condition
评估样品解决方案:配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸:配备 RT,或根据请求配备蓝冰。

计算工具摩尔浓度 / 稀释 / 分子量 / 单位换算 / 体内配方 / 溶解度

g/mol