Bst DNA Polymerase, Large Fragment

GLPBIO 的Bst DNA Polymerase, Large Fragment，即嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus, Bst) DNA Polymerase I大片段，具有5'→3' DNA聚合酶活性，不具有3'→5'和5'→3'的核酸外切酶活性。Bst DNA Polymerase, Large Fragment具有很强的链置换(strand displacement)能力，可应用于核酸的等温扩增反应，如环介导的等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)和滚环扩增(Rolling-circle amplification, RCA)等。

Bst DNA Polymerase, Large Fragment介导的等温扩增温度一般在50-68℃之间，通常为65℃。与Bst DNA Polymerase 2.0相比，本产品在进行等温扩增时不具有将dUTP掺入合成的DNA链的能力。

Bst DNA Polymerase具有5'→3'的核酸外切酶活性，而Bst DNA Polymerase, Large Fragment通过删除突变而缺失了5'→3'核酸外切酶活性。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 65℃。

GLPBIO生产的Bst DNA Polymerase, Large Fragment酶活性参考图1。

图1. Bst DNA Polymerase, Large Fragment进行环介导等温扩增反应的效果。使用本产品或N公司的Bst DNA Polymerase, Large Fragment，在25µl体系，分别以不同量的(10^-1, 10^-2, 10^-3, 10^-4, 10^-5, 10^-6, 10^-7, 10^-8, 10^-9 ng)烟草花叶病毒的CaMV35启动子为模板，8U的Bst DNA Polymerase, Large Fragment (图1中简写为Bst)，引物：1.6µM FIP/BIP、0.2µM F3/B3、0.4µM LoopF/B，1.4mM dNTP each，在1X Bst Reaction Buffer中补加MgSO₄至终浓度为8mM，65℃孵育1h，80℃加热20min灭活，然后进行1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与Competitor N公司的产品相比，具有略好或至少相当的酶活性效果。M, DNA marker。

来源：Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I的大片段通过大肠杆菌重组表达和纯化而获得。

纯度：无DNA内切酶和外切酶活性。

用途：环介导等温扩增LAMP、解旋酶等温基因扩增(HDA)等DNA等温扩增，多重置换扩增(MDA)，全基因组扩增(WGA)，高GC含量DNA的测序，纳克级DNA模板的快速测序，建库测序等。

酶储存溶液：10mM Tris-HCl (pH7.5), 50mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) glycerol。

10X Bst Reaction Buffer：200mM Tris-HCl, 100mM KCl, 100mM (NH₄)₂SO₄, 20mM MgSO₄, 1% Triton X-100, pH8.8 at 25°C。

失活或抑制：80℃加热20min。

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

Bst DNA Polymerase, Large Fragment不具有3'→5'核酸外切酶活性。

建议等温扩增反应温度不能高于70℃，否则会导致酶失活。

Bst DNA Polymerase，Large Fragment不能用于热循环测序和PCR。

每次等温扩增实验注意设置无模板DNA作为阴性对照。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。