AQC
(Synonyms: 6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯类,6-Aminoquinolyl-N-hydroxysccinimidyl carbamate) 目录号 : GC39738
AQC是一种反应性探针,用于柱前衍生化伯胺和仲胺,包括氨基酸、肽、蛋白质和多胺中的氨,形成稳定且高荧光的衍生物,显示出248/398nm的激发/发射最大值。
Cas No.:148757-94-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
AQC is a reactive probe used for pre-column derivatization of primary and secondary amines—including amino groups in amino acids, peptides, proteins, and polyamines—yielding stable, highly fluorescent derivatives with excitation/emission maxima at 248/398nm. AQC has been employed for the chromatographic separation and analysis of amino acids and polyamines[1].
References:
[1] Pawlowska M, Chen S, Armstrong DW. Enantiomeric separation of fluorescent, 6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate, tagged amino acids. J Chromatogr. 1993 Jul 9;641(2):257-65.
AQC是一种反应性探针,用于柱前衍生化伯胺和仲胺,包括氨基酸、肽、蛋白质和多胺中的氨,形成稳定且高荧光的衍生物,显示出248/398nm的激发/发射最大值。已用于衍生氨基酸和多胺的色谱分离和分析[1]。
本方案仅提供一个指导,请根据您的具体需要进行修改。
1、蛋白制备
(1)为获得最佳标记效果,请制备蛋白 (抗体) 浓度为 2mg/mL。
(2) 蛋白溶液的 PH 值为 8.5±0.5。如果 pH 值低于 8.0,应使用 1M 碳酸氢钠进行调节。
(3) 如果蛋白浓度低于 2mg/mL,标记效率会大大降低。为获得最佳标记效率,建议终蛋白浓度范围为 2-10mg/mL。
(4)蛋白必须在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 的缓冲液中,并且铵离子,否则会影响标记效率。
2、染料制备 (以 AQC 为例)
(1)将无水 DMSO 加入 AQC 小瓶中,制成 10mM 储备液。通过移液器或涡旋混合均匀。
3、染料用量的计算
(1)反应所需的 AQC 的量取决于待标记蛋白的量,AQC 染料与蛋白的最佳摩尔比为 10 左右。
(2)Example:假设所需的 marker protein 为 500μL 2mg/mL IgG (MW=150,000),用 100μL DMSO 溶解 1mg AQC,得到所需的 AQC 体积为 1.9μL,详细计算过程如下:
mmol (IgG) =mg/mL (IgG) ×mL (IgG)/MW (IgG) =2mg/mL × 0.5mL/150,000mg/mmol= 6.7×10-6mmol
mmol (AQC) =mmol (IgG) × 10=6.7×10-6 mmol×10=6.7 × 10-5 mmol
μL (AQC) = mmol (AQC) ×MW (AQC)/mg/μL (AQC) =6.7 ×10-5mmol ×285.25mg/mmol/0.01mg/μL=1.9 μL (AQC)
4、运行偶联反应
(1)将适量新鲜制备的 10mg/mL AQC 缓慢加入到 0.5mL 蛋白质样品中在溶液中,轻轻摇动混匀,然后短暂离心,将样品收集在反应管底部。请勿混匀,以免蛋白样品变性失活。
(2)将反应管在室温下在黑暗中孵育,每 10-15 分钟轻轻旋转一次,总共 60 分钟。
5、纯化偶联物(以下方案是使用 SepHadex G-25 柱纯化染料-蛋白偶联物的示例)
(1)根据制造说明准备 SepHadex G-25 柱。
(2)将反应混合物加载到 SepHadex G-25 柱的顶部。
(3) 一旦样品在顶部树脂表面下方运行,立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
(4)向所需样品添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。
References:
[1]Bosch L, Alegría A, Farré R. Application of the 6-aminoquinolyl-N-hydroxysccinimidyl carbamate (AQC) reagent to the RP-HPLC determination of amino acids in infant foods. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2006 Feb 2;831(1-2):176-83.
Cas No. | 148757-94-2 | SDF | |
别名 | 6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯类,6-Aminoquinolyl-N-hydroxysccinimidyl carbamate | ||
Canonical SMILES | O=C(ON1C(CCC1=O)=O)NC2=CC=C3N=CC=CC3=C2 | ||
分子式 | C14H11N3O4 | 分子量 | 285.25 |
溶解度 | DMSO: 125 mg/mL (438.21 mM) | 储存条件 | Store at -20°C |
General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度,请将管子加热至37℃,然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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Shipping Condition | 评估样品解决方案:配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸:配备RT,或根据请求配备蓝冰。 |
制备储备液 | |||
![]() |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
1 mM | 3.5057 mL | 17.5285 mL | 35.057 mL |
5 mM | 0.7011 mL | 3.5057 mL | 7.0114 mL |
10 mM | 0.3506 mL | 1.7528 mL | 3.5057 mL |
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量) | ||||||||||
给药剂量 | mg/kg | 动物平均体重 | g | 每只动物给药体积 | ul | 动物数量 | 只 | |||
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方) | ||||||||||
% DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
计算重置 |
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL saline,混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的;
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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