Anti-c-Myc Magnetic Beads

1. 提前准备洗涤缓冲液：如洗涤缓冲液PBST: 1×PBS + 0.5% Tween-20, pH 7.4
2 磁珠预处理
混悬 Anti-c-Myc Magnetic Beads，取 20 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中， 加入 500 μL 洗涤缓冲液，充分混悬，置于磁力架上磁性分离，弃上清。重复以上洗涤步骤 2 次。
3 样品的结合
在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 细胞裂解液，充分混悬，置于翻转混合仪孵育，室温孵育 2 小时或者 4℃ 条件下孵育过夜。置于磁力架上磁性分离，弃上清。
注意：结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象，不会影响实验结果。
4 洗涤
在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 洗涤缓冲液，充分混悬磁珠，磁性分离，弃上清。重复以上洗涤步骤 3 次，直到洗涤后的上清液中 OD 280 小于0.05 为止。
注意：如上清液的 OD 280 大于 0.05，适当增加洗涤次数即可。
5 洗脱
在上述分离得到的磁珠中加入 50 μL 的 1× 蛋白上样缓冲液，95℃ 加热 5分钟。冷却后，磁性分离，取上清进行 SDS-PAGE 检测。
注意：
1. 本产品 pH 值为 6-8，禁止冻结。
2. 本产品应避免离心、干燥或冻存，禁止长时间置于磁场，可能会珠聚团，抗体结合后操作过程应轻柔，避免抗体脱落。
3. 使用本产品进行 IP 实验前，需先确认样品中 c-Myc 融合蛋白的表达情况。
4. 为最大限度的降低蛋白质降解，请配合使用蛋白酶抑制剂cocktails (产品目录号：GK10014)。
5. 不要使用含有 dithiothreitol (DTT) 的细胞裂解液样品，DTT 可能会引起磁珠上的 c-Myc 抗体脱落。
6. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
常见问题：
1. 检测结果条带背景过高：
A. 可能是由于蛋白蛋白非特异性结合到抗体、磁珠或 EP 管上，建议对裂解液进行预处理，去除非特异结合的蛋白；在最后一次洗涤前，转移整个样品到新的 EP 管中，然后磁性分离或离心分离。
B. 洗涤效果不佳，也会导致条带较高的背景，建议增加洗涤时间与次数。
2. 检测结果无条带？
A. c-Myc 标签蛋白没有表达可能导致检测结果无条带，建议操作：a. 确保目的蛋白带有 c-Myc 标签；b. 制备新鲜的裂解液；c. 使用恰当的蛋白酶抑制剂 (目录号：GK10014)。
B. 孵育时间不足可能导致检测结果无条带，建议延长孵育时间。
C. 裂解液中存在高浓度的 DTT、2-巯基乙醇或其他的还原剂等干扰物质，建议选用合适的裂解液。