本方案仅提供一个指导,请根据您的具体需要进行修改。
1、 制备1 -10mg/mL的Alcian Blue 8GX染色液:向ddH2O中加入0.6mL冰醋酸,使最终体积为20 mL。然后加入20-200 mg固体Alcian Blue 8GX,充分溶解后使用0.22μm滤膜过滤除菌。
注意:配置好的染液4℃避光保存,建议在一个月内用完。
2、细胞悬浮染色(以6 孔板为例)
(1)悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液,使用PBS清洗两次,每次5分钟。
(2)贴壁细胞使用PBS清洗两次,加入胰酶消化细胞,消化完成后经1000g离心3-5min。
(3)加入1mL染料工作液重悬细胞,室温避光孵育30-60min分钟,不同细胞最佳培养时间不同。
(4)孵育结束后,经1000g离心5分钟,去除上清液,加入PBS清洗2-3次,每次5分钟。
(5)使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞,通过显微镜进行观察。
3、细胞贴壁染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片,吸出过量的培养基,将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞,室温避光孵育30-60min分钟。
(4)吸弃染料工作液,使用培养液清洗盖玻片2~3次,每次5分钟。
4、显微镜检测:使用光学显微镜对染色细胞进行观察。
注意事项:为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. Hiroki Ueharu,et. Isolation and Culture of Cranial Neural Crest Cells from the First Branchial Arch of Mice. 2022 Apr 5;12(7):e4371. doi: 10.21769/BioProtoc.4371.
[2]. J Tas. The Alcian blue and combined Alcian blue--Safranin O staining of glycosaminoglycans studied in a model system and in mast cells. 1977 Mar;9(2):205-30. doi: 10.1007/BF01003632.