ALC-0159在mRNA-LNP制备中的应用
本实验方案根据研究内容整理,仅供参考,请根据实际需求进行调整。
(1)试剂准备:脂质混合物(LM)配方准备:ALC-0159作为聚乙二醇(PEG)脂质成分,另外取ALC-0315,DSPC,胆固醇溶解于乙醇中,配制成12.5mM的乙醇相储备液。
(2)LNP制备:使用微流控平台,将含有mRNA(120μg/mL,pH=4.0乙酸钠缓冲液)的水相与上述乙醇相脂质溶液以3:1的流速比(水相:有机相)和12mL/min的总流速混合。离子化脂质与mRNA的N/P比为6。通过自组装过程形成包载mRNA的LNP。
(3)LNP后处理:将初步合成的LNP用1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)按1:20(用于体外实验)或1:40(用于体内实验)稀释,随后使用50000MWCO的离心过滤器在2000×g下离心5分钟进行浓缩。最终溶液经0.22μm过滤器过滤,并于4°C储存备用。
(4)表征与应用:制备的LNP平均尺寸为75-90nm,具有高均一性(PDI<0.1)和高mRNA包封率(95-100%)。通过体外细胞系(如HepG2, DC2.4)转染和体内小鼠模型评估其作为mRNA递送工具的效能。
注意事项:
(1)研究中ALC-0159的摩尔分数约为1.7%,此比例有助于平衡LNP的稳定性与潜在的免疫原性。
(2)所有LNP制剂在4°C下储存一个月内,其粒径、多分散性、Zeta电位和包封率均保持稳定。
(3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Gambaro R, Rivero Berti I, et al. Optimizing mRNA-Loaded Lipid Nanoparticles as a Potential Tool for Protein-Replacement Therapy. Pharmaceutics. 2024 Jun 6;16(6):771.