5-(Biotinamido)pentylamine

目录号: GC62166纯度: >95.00%同义词: 生物素-氨基
5-(Biotinamido)pentylamine是一种带有C5碳链间隔基的生物素衍生物。

5-(Biotinamido)pentylamine
Cas No.: 115416-38-1
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    Nature
    641, 529–536 (2025)
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    Nature
    628, 630–638 (2024)
  • Nature cover
    Nature
    632, 686–694 (2024)
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    Nature
    618, 1017–1023 (2023)
  • Nature cover
    Nature
    610, 366–372 (2022)
  • Cell cover
    Cell
    187(9):2288-2304 (2024)
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    Cell
    183(7):1867-1883 (2020)
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    Science
    388(6745) (2025)
  • Science cover
    Science
    387(6739) (2025)
  • Science cover
    Science
    387(6734) (2025)
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    Cell Research
    35, 97–116 (2025)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    34, 683–706 (2024)
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    Cell Research
    33, 273–287 (2023)
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    Cell Research
    33, 546–561 (2023)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    33, 904–922 (2023)
  • Cell Research cover
    Cell Research
    31, 1291–1307 (2021)

产品描述 Description

5-(Biotinamido)pentylamine is a biotin derivative with a C5 carbon chain spacer [1]. 5‑(Biotinamido)pentylamine is mainly used as an amine donor substrate for transglutaminase (TG). After being catalyzed by the enzyme, it can covalently bind to the glutamine residues in the protein through a γ‑amide bond, thereby introducing the biotin tag into the target protein [2-3].

References:
[1]. Ikura K, Kita K, Fujita I, et al. Identification of amine acceptor protein substrates of transglutaminase in liver extracts: use of 5-(biotinamido) pentylamine as a probe. Archives of biochemistry and biophysics. 1998 Aug 15; 356(2): 280-286.
[2]. Slaughter TF, Achyuthan KE, Lai TS, et al. A microtiter plate transglutaminase assay utilizing 5-(biotinamido) pentylamine as substrate. Analytical biochemistry. 1992 Aug 15; 205(1): 166-171.
[3]. Ichikawa A, Ishizaki J, Morita M, et al. Identification of new amine acceptor protein substrate candidates of transglutaminase in rat liver extract: use of 5-(biotinamido) pentylamine as a probe. Bioscience, biotechnology, and biochemistry. 2008 Apr 23; 72(4): 1056-1062.

5-(Biotinamido)pentylamine是一种带有C5碳链间隔基的生物素衍生物 [1]。5-(Biotinamido)pentylamine主要用作转谷氨酰胺酶(TG)的胺供体底物。在酶催化下,它可以通过γ-酰胺键与蛋白质中的谷氨酰胺残基共价结合,从而将生物素标签引入目标蛋白 [2-3]

实验参考方法 Experimental Reference Method

本方案描述了如何使用5‑(Biotinamido)pentylamine作为生物素化胺供体底物,在微孔板(ELISA)或斑点印迹法中测定转谷氨酰胺酶(TG)活性。实际操作条件可能需要根据TG异构体、酶浓度和样品类型进行优化 [1-2]

1. 试剂和材料准备

准备5‑(Biotinamido)pentylamine、纯化的TG酶、N,N′-二甲基酪蛋白、链霉亲和素-辣根过氧化物酶(HRP)、用于比色读数的对硝基苯基磷酸盐(pNPP)、检测缓冲液(100mM Tris-HCl,pH 7.4,含10-20mM DTT和10-20mM CaCl₂)以及封闭/洗涤缓冲液(1-5% BSA)。

2. 实验步骤

(1)包被和封闭(用于ELISA试剂盒)

用100µg/mL二甲基酪蛋白(溶于 PBS)包被微孔板,4℃过夜。用TBST洗涤,并用1-5% BSA室温封闭1小时。

(2)TG反应

使用96孔板,将0.5–2 mM的5‑(Biotinamido)pentylamine、0.1–1µg/孔的TG酶、50–100µg总蛋白裂解物与含有Tris-HCl、DTT和CaCl₂的反应缓冲液混合,组成反应体系,在37°C孵育30–60分钟以催化胺供体与蛋白底物的共价结合。

(3)洗涤

终止反应,用TBST洗涤孔或膜3次,以去除未结合的试剂。

(4)检测

加入用封闭缓冲液稀释的链霉亲和素-辣根过氧化物酶(HRP)或链霉亲和素-IRDye偶联物,室温孵育1小时,然后洗涤3次。

(5)信号显影

如需比色读数,加入对硝基苯丙氨酸(pNPP)底物,15-30分钟后在405nm处测量吸光度。如需荧光或化学发光检测,请使用合适的成像仪进行扫描。

注意事项

(1)优化甘油三酸酯(TG)和底物浓度,以确保线性检测。避免信号饱和。

(2)包括经EGTA处理的对照(不含Ca²⁺)和不含酶的空白对照,以确定背景信号。

(3)使用已知的甘油三酸酯(TG)抑制剂(例如胱胺或Z-DON)作为抑制筛选的阳性对照。

(4)使用复杂的裂解物时,斑点印迹检测可提供更高的特异性和更好的可视化效果。

(5)信号可根据总蛋白含量或管家酶活性进行标准化。

(6)5‑(Biotinamido)pentylamine储备溶液(例如,50mM水溶液或DMSO溶液)应储存在-20℃下并避光。

References:

[1]. Slaughter TF, Achyuthan KE, Lai TS, et al. A microtiter plate transglutaminase assay utilizing 5-(biotinamido) pentylamine as substrate. Analytical biochemistry. 1992 Aug 15; 205(1): 166-171.

[2]. Ichikawa A, Ishizaki J, Morita M, et al. Identification of new amine acceptor protein substrate candidates of transglutaminase in rat liver extract: use of 5-(biotinamido) pentylamine as a probe. Bioscience, biotechnology, and biochemistry. 2008 Apr 23; 72(4): 1056-1062.

产品文档 Product Documents

Purity:>95.00%

化学性质Chemical Properties

CAS 号
115416-38-1
同义词
生物素-氨基
分子式
C15H28N4O2S
分子量
328.47 g/mol
溶解性
DMSO : 100 mg/mL (304.44 mM; Need ultrasonic)
保存条件
Store at -20°C
General tips
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。
为了提高溶解度,请将管子加热至 37°C,然后在超声波浴中震荡一段时间。
Shipping Condition
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计算工具摩尔浓度 / 稀释 / 分子量 / 单位换算 / 体内配方 / 溶解度

g/mol